ʻAʻohe hōʻailona hoʻonui

1. Nalo ka hana o ka Taq DNA Polymerase i loko o ka pahu ma muli o ka mālama pono ʻole a i ʻole ka pau ʻana o ka pahu.
Manaʻo: E hōʻoia i nā kūlana mālama o ka pahu;e hoʻohui hou i ka nui kūpono o Taq DNA Polymerase i ka ʻōnaehana PCR a i ʻole e kūʻai i kahi PCR Kikoʻo Real Time hou no nā hoʻokolohua pili.

2. Aia ka nui o nā mea pale o Taq DNA Polymerase i loko o ka DNA template.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻomaʻemaʻe hou i ka template a i ʻole e hōʻemi i ka nui o ka template i hoʻohana ʻia.

3. ʻAʻole kūpono ka Mg2 + kaʻina.
Manaʻo Manaʻo: ʻO ka Mg2+ ka ʻike o ka 2 × Real PCR Mix a mākou e hāʻawi ai he 3.5mM.Eia nō naʻe, no kekahi mau kumu mua a me nā laʻana, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka Mg2+.No laila, hiki iā ʻoe ke hoʻohui pololei iā MgCl2 no ka hoʻonui ʻana i ka ʻike Mg2+.Manaʻo ʻia e hoʻonui i ka Mg2+ 0.5mM i kēlā me kēia manawa no ka optimization.

4. ʻAʻole kūpono nā kūlana PCR amplification, a ʻaʻole kūpono ke kaʻina kumu a i ʻole ka ʻike.
Manaʻo: hōʻoia i ka pololei o ke kaʻina kumu mua a ʻaʻole i hoʻohaʻahaʻa ʻia ka primer;inā ʻaʻole maikaʻi ka hōʻailona hoʻonui, e hoʻāʻo e hoʻohaʻahaʻa i ka mahana annealing a hoʻoponopono pono i ka ʻike kumu.

5. He liʻiliʻi a ʻoi aku ka nui o ka template.
Manaʻo Manaʻo: E hana i ka hoʻoheheʻe ʻana i ka gradient linearization template, a koho i ka manaʻo kumu me ka hopena PCR maikaʻi loa no ka hoʻokolohua PCR ʻOiaʻiʻo.

He kiʻekiʻe loa ka waiwai fluorescence o ka NTC

1.Reagent contamination i ka wā o ka hana.
Manaʻo: Hoʻololi me nā mea hou no nā hoʻokolohua PCR ʻOiaʻiʻo.

2. Ua loaʻa ka contamination i ka wā o ka hoʻomākaukau ʻana i ka ʻōnaehana hopena PCR.
Manaʻo Manaʻo: E lawe i nā mea pale pono i ka wā e hana ai, e like me: ke komo ʻana i nā mīkina lima latex, me ka hoʻohana ʻana i ka piko pipette me kahi kānana, etc.

3. Ua hoʻohaʻahaʻaʻia nā kumu mua, aʻo ka hoʻohaʻahaʻaʻana o nā kumu mua e hoʻonui i ka hoʻonuiʻole.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻohana i ka electrophoresis SDS-PAGE e ʻike inā ua hoʻohaʻahaʻa ʻia nā primers, a hoʻololi iā lākou me nā primers hou no nā hoʻokolohua PCR Real Time.

Primer dimer a i ʻole ka hoʻonui kikoʻī ʻole

1. ʻAʻole kūpono ka Mg2 + kaʻina.
Manaʻo Manaʻo: ʻO ka Mg2 + ka nui o ka 2 × Real PCR EasyTM Mix a mākou e hāʻawi ai he 3.5 mM.Eia nō naʻe, no kekahi mau kumu mua a me nā laʻana, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka Mg2+.No laila, hiki iā ʻoe ke hoʻohui pololei iā MgCl2 no ka hoʻonui ʻana i ka ʻike Mg2+.Manaʻo ʻia e hoʻonui i ka Mg2+ 0.5mM i kēlā me kēia manawa no ka optimization.

2. He haʻahaʻa loa ka mahana annealing PCR.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻonui i ka mahana o ka PCR annealing e 1 ℃ a i ʻole 2 ℃ i kēlā me kēia manawa.

3. He lōʻihi loa ka huahana PCR.
Manaʻo Manaʻo: Pono ka lōʻihi o ka huahana PCR Real Time ma waena o 100-150bp, ʻaʻole ʻoi aku ma mua o 500bp.

4. Ua hoʻohaʻahaʻaʻia nā kumu mua, aʻo ka hoʻohaʻahaʻaʻana o nā kumu mua e alakaʻi i keʻano o ka amplification kiko'ī.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻohana i ka electrophoresis SDS-PAGE e ʻike inā ua hoʻohaʻahaʻa ʻia nā primers, a hoʻololi iā lākou me nā primers hou no nā hoʻokolohua PCR Real Time.

5. ʻAʻole kūpono ka ʻōnaehana PCR, a i ʻole ka liʻiliʻi o ka ʻōnaehana.
Manaʻo Manaʻo: He ʻuʻuku loa ka ʻōnaehana pane PCR e hōʻemi i ka pololei o ka ʻike.ʻOi aku ka maikaʻi o ka hoʻohana ʻana i ka ʻōnaehana pane i ʻōlelo ʻia e ka mea hana PCR quantitative e holo hou i ka hoʻokolohua PCR Real Time.

ʻAʻole hiki ke hoʻihoʻi hou i nā waiwai quantitative

1. Ua hewa ka mea kani.
Manaʻo Manaʻo: Loaʻa paha nā hewa ma waena o kēlā me kēia puka PCR o ka mea kani, e hopena i ka maikaʻi ʻole o ka hana hou ʻana i ka wā o ka mālama ʻana a i ʻole ka ʻike ʻana.E ʻoluʻolu e nānā e like me nā kuhikuhi o ka mea hana pili.

2. ʻAʻole maikaʻi ka maʻemaʻe hāpana.
Manaʻo Manaʻo: E alakaʻi nā laʻana haumia i ka hana hou ʻana o ka hoʻokolohua, ʻo ia hoʻi ka maʻemaʻe o ka template a me nā kumu mua.ʻOi aku ka maikaʻi o ka hoʻomaʻemaʻe hou ʻana i ka template, a hoʻomaʻemaʻe maikaʻi ʻia nā primers e SDS-PAGE.

3. He lōʻihi loa ka hoʻomākaukau ʻana o ka ʻōnaehana PCR a me ka manawa mālama.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻohana i ka ʻōnaehana PCR ʻOiaʻiʻo no ka hoʻokolohua PCR ma hope koke o ka hoʻomākaukau ʻana, a mai haʻalele iā ia no ka lōʻihi loa.

4. ʻAʻole kūpono nā kūlana PCR amplification, a ʻaʻole kūpono ke kaʻina kumu a i ʻole ka ʻike.
Manaʻo: hōʻoia i ka pololei o ke kaʻina kumu mua a ʻaʻole i hoʻohaʻahaʻa ʻia ka primer;inā ʻaʻole maikaʻi ka hōʻailona hoʻonui, e hoʻāʻo e hoʻohaʻahaʻa i ka mahana annealing a hoʻoponopono pono i ka ʻike kumu.

5. ʻAʻole kūpono ka ʻōnaehana PCR, a i ʻole ka liʻiliʻi o ka ʻōnaehana.
Manaʻo Manaʻo: He ʻuʻuku loa ka ʻōnaehana pane PCR e hōʻemi i ka pololei o ka ʻike.ʻOi aku ka maikaʻi o ka hoʻohana ʻana i ka ʻōnaehana pane i ʻōlelo ʻia e ka mea hana PCR quantitative e holo hou i ka hoʻokolohua PCR Real Time.