Hoʻolauna:

ʻO RNA, ka inoa ʻepekema ribonucleic acid, kona pōkole mai RiboNucleic Acid, he ʻano ʻakika nucleic i hana ʻia ma ka hoʻohui ʻana i nā kakini ribonucleotides ma o nā kaula phosphodiester.

ʻO ke kumu o ka ʻimi ʻana i ka RNA, ʻo ia ka unuhi ʻana i ka Total RNA me ka pollution-free, a ʻo ke kumu kumu o ka unuhi ʻana o RNA hiki ke hōʻuluʻulu ʻia penei:

1. E hoʻopau mua i nā pūnaewele

2. A laila wehe i nā mea haumia macromolecular (proteins, lipids, DNA, etc.)

3. ʻO ka hope, ua hoʻokahe ʻia ka RNA i ka wā e wehe ana i nā paʻakai a me nā mea hoʻoheheʻe organik, a hoʻomaʻemaʻe hou i ka RNA.

Mamua a me keia manawa o ke ano ohi

ʻO ka hanauna mua o ka RNA extraction method ka TRIzol precipitation method (reagents i hoʻohana ʻia me ka guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, etc.) i hana ʻia e ke kupuna kāne i kapa ʻia ʻo Piotr Chomczynski a me ke kupuna wahine Nicoletta Sacchi, no ka mea, ʻae kēia mea hana i ka RNA extraction wikiwiki a maʻalahi, mai ia manawa i hoʻomaka ai ka upsurge o ka RNA.

Ma hope mai, kūʻai aku ʻo Pāpā i kēia palapala hōʻailona iā Invitrogen, a ua hoʻolaha ʻo Invitrogen i kēia ʻano hana i ka honua a lilo ia i mea hoʻohana nui ʻia.

Ma hope mai, ua loaʻa iā Invitrogen e Thermo!

Huahana makamaka: Invitrogen's TRIzol reagent

Eia nō naʻe, pono ke ʻano o ka ua TRIzol i ka nui o ka ua a me ka unuhi ʻana o RNA, a he mea ʻawaʻawa nā reagents i hoʻohana ʻia a lōʻihi ka hana.

No laila, ua puka mai ke ʻano hoʻomaʻemaʻe kolamu-enzyme lua, me ka hoʻohana ʻana i ka membrane silica gel ma ke ʻano he nucleic acid adsorption mea e hoʻonui ai i ka hoʻihoʻi ʻana o ka RNA i ka hāpana ʻoiai e wehe ana i nā mea haumia ʻē aʻe.

ʻO ke ala o ka lua o ka hanauna e hoʻomaʻamaʻa i ka hana ma ke kumu o ka hana paʻa, hoʻemi i ka mea pilikia, a hoʻomaikaʻi i ka pono o ka unuhi ʻana o RNA.

Nā huahana ʻelele: QIAGEN RNeasy a me ka hapa nui o nā huahana kūloko

Eia naʻe, pono nā ʻano hana mua a me ka lua o ka hanauna i ka hoʻohana ʻana i ka DNase e hoʻoneʻe i ka DNA contamination, kahi e lawe mai ai i kahi pilikia i nā hoʻokolohua ma lalo.Na ke koena DNase e hoʻemi i ka pono o ka hoʻohuli ʻana i ka unuhi a hōʻemi i ka synthesis cDNA first-strand, a laila e pili ana i ka pololei o nā hopena.

No laila, ʻo ke ʻano o ka unuhi ʻana o ka hanauna ʻekolu i hoʻopaʻa ʻia ma ke kumu o ka lua o ka hanauna.ʻAʻole pono ka hoʻokolohua e hoʻohui i nā enzymes, a hiki ke loaʻa maʻalahi ka RNA me ʻelua kolamu wale nō.

Kolume 1: Kolume Hoomaemae DNA e holoi i ka DNA

Kolu 2: Kolume RNA-wale wale no e hoopili a ho'iho'i hou i ka RNA

ʻO kēlā hana maʻalahi ʻaʻole wale e mālama i ka manawa, akā hoʻomaʻamaʻa hoʻi i ka hana o nā hoʻokolohua lalo!

Nā huahana ʻelele: QIAGEN RNeasy Plus a meForegeneʻO nā huahana hoʻomaʻemaʻe RNA

(RNeasy Plus)

（ʻO ForegeneMea Hoʻokaʻawale RNA Hui Pū ʻIa）

E haʻi mālie iā ʻoe!Hāʻawi pū ka pahu RNA o Foregene i kahi RNase Eraser maʻalahi loa e hoʻohana, hiki iā ia ke hoʻopau loa i ka 400μg o RNase ma ka ʻili paʻa i 1 mau minuke, me ka hoʻohui ʻole ʻana i nā mea ʻawaʻawa i ke kino kanaka!

Pic1: Papa hoʻohālikelike kaʻina hana

Hiki i nā huahana Foregene ke hoʻopau i ka unuhi ʻana o RNA i ʻelua mele wale nō, mai hoʻolili i nā poʻe ʻē aʻe i kāu holomua hoʻokolohua!

Pic2:Enā hopena hoʻokolohua palapala hoʻohālikelike

ʻO ka hanauna mua (1: TRIzol)

Ka lua o ka hanauna (2: RNeasy o QIAGEN)

ʻO ke kolu o ka hanauna (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: kiʻi qPCR (kiʻi kipi hoʻonui)

ʻO ka hanauna mua (ʻo ka ʻōmaʻomaʻo ʻo TRIzol -, ʻulaʻula ʻo TRIzol +)

ʻO ka lua o ka hanauna (ʻulaʻula ʻo QIAGEN RNeasy +)

ʻO ke kolu o ka hanauna (ʻulaʻula ʻo QIAGEN RNeasy hoʻohui, ʻo Foregene ka ʻōmaʻomaʻo)

(E hoʻomanaʻo: ʻo ka pakuhi qPCR "-" e hōʻike ana ʻaʻole i hoʻohui ʻia ʻo DNase a ʻaʻole i wehe ʻia ka DNA contamination.

ʻO kēlā me kēia hoʻomaikaʻi ʻenehana ʻo ia ka hoʻomohala ʻana o ka hana o ka hoʻokolohua ma kahi ala maʻalahi a ʻoi aku ka maikaʻi o ka mea hoʻohana.

Manaʻo ʻo Foregene e kōkua i nā mea noiʻi ʻepekema hou aʻe e mālama i ka manawa hoʻokolohua a me ke kumukūʻai, e loaʻa i nā hopena hoʻokolohua kiʻekiʻe, a hui pū i nā holomua noiʻi ʻepekema waiwai nui.