Ke hoʻohana nei ʻoe iā Trizol e wehe i ka RNA?
E gosh, mai ʻae iaʻu e hopohopo no kou olakino!
Ua kokoke ʻo Trizol e hoʻokaʻawale ʻia, mai haʻi mai iaʻu aia ʻoe i ka pōʻeleʻele?

ʻO ka mea nui o Trizol reagent he phenol, a ua hoʻohui pū ʻia nā reagents organik e like me chloroform i ka hana hoʻokolohua.ʻO ka loaʻa ʻana i ka wā lōʻihi e pōʻino ai kou olakino, ʻoi aku ka pili pono ʻana i ka ʻili hiki ke hoʻoulu i ke ahi kemika nui a me nā ʻōpala mau loa.

Ma lalo o nā kūlana maʻamau, hiki i nā hoa hana ke hoʻoemi wale i nā pōʻino ma ke kāʻei ʻana iā lākou iho (e hoʻohana ana i nā lole lab, nā mīkina lima a me nā masks).

A ʻo kaʻu ʻōlelo aʻo iā ʻoe: e ʻoluʻolu e hoʻololi pololei iā Trizol e pale aku i ka pōʻino mai ke kumu.

1. ʻO ka hua mua o ka hōʻiliʻili RNA
Hele mai i ka makahiki 1987 (Trizol reagents)

pono:
Hoʻopau piha loa

Nā hemahema:
ʻO nā mea hoʻonāʻawaʻawa e like me ka guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform e koiʻia;
ʻO ka hana paʻakikī;
Pono e hoʻohana i ka DNase e wehe i ka ʻino DNA

2. ʻO ka lua o ka hanauna hua o ka RNA extraction
Hele mai i ka makahiki 1994 (QIAGEN RNeasy a me ka hapa nui o nā huahana kūloko)

pono:
Hoʻohana ʻia ke ʻano centrifugal kolamu, maʻalahi ke hana;

Poino:
Pono e centrifuge e wehe i nā ʻōpala
Pono e hoʻohana i ka DNase e wehe i ka ʻino DNA

3.ʻO ke kolu o ka hanauna hua o ka RNA extraction
E puka mai ana i ka makahiki 2005 (QIAGEN ʻO RNeasy Plus a me ForegeneNā huahana hui hoʻomaʻemaʻe RNA)

pono:
E hoʻohana pololei i ke kolamu wehe DNA e wehe i ka DNA a me nā ʻōpala i ka manawa like, e mālama i ka manawa a me ka hoʻoikaika;
Palekana a maʻalahi, ʻaʻohe pono e hoʻohui i ke kolamu kānana a me DNase e wehe maʻalahi i nā haumia a pale aku i ka hoʻohaumia DNA

E nānā i nā ʻokoʻa hana ma waena o ka huahana mua (Trizol), ka huahana lua (RNeasy) a me ka huahana ʻekolu o ka hanauna (Foregene) o ka RNA extraction:

ʻO ka hana i loko o ke kiʻi ua maopopo: ʻo ke kolu o ka hanauna o nā huahana i ʻike maopopo ʻia

ʻEkolu mau huaʻōlelo e wehewehe: maʻalahi!ʻO ka wikiwiki!Palekana

ʻO ka pakuhi PK o nā hopena hoʻokolohuano ka meaka hanauna mua, ka lua a me ke kolu o ka hanauna o ka RNA extraction:

1. Electrophoretogram

ʻO ka hanauna mua (1: Trizol)
Ka lua o ka hanauna (2:QIAGEN RNeasy)
ʻO ke kolu o ka hanauna (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

He aha ke ʻano o ka huahana maikaʻi, e ʻike ʻoe ma ka hoʻohālikelike
Lawe ʻia ʻo RNA me ka hoʻohana ʻana i ka pahu Foregene
ʻAʻole wale ka noʻonoʻo kiʻekiʻe akā ke kūpaʻa maikaʻi

2.qPCR graph

ʻO ka hanauna mua (Trizol)

ʻO ka lua o ka hanauna (sky blueʻo ia hoʻiQIAGEN RNeasy-, ulaulaʻo ia hoʻiQIAGEN RNeasy +)

ʻO ke kolu o ka hanauna (pouliuli ʻo Foregene, ʻōmaʻomaʻo ʻo QIAGEN RNeasy hoʻohui)

(E hoʻomanaʻo: ʻO ka lua o ka QIAGEN RNeasy o ka qPCR graph, ʻo ia ka mea ʻaʻole i hoʻohui ka kit i ka DNase a ʻaʻole hoʻopau i ka hoʻohaumia DNA. No laila, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka CT a ʻaʻole pololei ka hopena; QIAGEN RNeasy + ʻo ia hoʻi ua hoʻohui ʻia ka DNase a ua wehe ʻia ka ʻino DNA, a pololei ka hopena)

Inā he electrophoregram a i ʻole ka quantitative PCR amplification curve graph, ʻaʻole haʻahaʻa ka maikaʻi o nā huahana Foregene i nā huahana i lawe ʻia mai nā haole.