Nānā nui
ʻIke wikiwiki i nā mea kanu transgenic
Text/Tong Yucheng
Hana hoʻokolohua/Han Ying
Lunahooponopono/Wen Youjun
Hua'ōlelo/1600+
Manaʻo manawa heluhelu / 8-10 minuke
ʻIke wikiwiki i nā mea kanu transgenic
Ma ke ʻano he mea hou i loko o ka hale hana, ʻaʻole ia he hana maikaʻi e nānā i nā mea kanu maikaʻi mai kahi pūʻulu o nā mea kanu me ka haʻahaʻa haʻahaʻa.ʻO ka mea mua, pono e unuhi ʻia ka DNA mai ka nui o nā laʻana, a laila e ʻike ʻia nā genes haole e ka PCR.Eia nō naʻe, ʻaʻole hiki ke hoʻoholo inā loaʻa nā ʻike i hala a i ʻole nā ʻike hoʻopunipuni..He mea kōkua ʻole ke alo i ia kaʻina hana hoʻokolohua a me nā hopena?Mai hopohopo, ke aʻo aku nei ke kaikuaʻana iā ʻoe pehea e nānā pono ai i nā mea kanu transgenic maikaʻi a pololei.
KaʻAnuʻu 1: Hoʻolālā ʻike mua
E hoʻoholo i ka gene endogenous a me ka exogenous gene e ʻike ʻia e like me ka laʻana e hoʻāʻo ʻia, a koho i kahi ʻelele 100-500bp ʻelele ma ka gene no ka hoʻolālā mua.Hiki i nā kumu mua maikaʻi ke hōʻoia i ka pololei o nā hopena ʻike a hoʻopōkole i ka manawa ʻike (e ʻike i ka appendix no nā primers ʻike maʻamau).
Nānā:
Pono nā kumu mua i hoʻolālā hou ʻia e hōʻoia i ka pololei, pololei, a me ka palena ʻike o ka ʻike ma mua o ka hana ʻana i ka ʻike nui.
KaʻAnuʻu 2:E hoʻomohala i ka protocol hoʻokolohua
Ka mana maikaʻi: E hoʻohana i ka DNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia i loko o ka ʻāpana i hoʻopaʻa ʻia ma ke ʻano he maʻamau e hoʻoholo ai inā he maʻamau ka PCR ʻōnaehana a me nā kūlana.
Manaʻo maikaʻi ʻole: E hoʻohana i kahi hōʻailona DNA a i ʻole ddH2ʻAʻole i loaʻa ka ʻāpana i hoʻopaʻa ʻia ma ke ʻano he laʻana e ʻike ai inā he kumu o ka haumia i loko o ka ʻōnaehana PCR.
Ka mana kuhikuhi i loko: e hoʻohana i ka hui mua/probe o ka gene endogenous o ka laʻana e hoʻāʻo ʻia e loiloi inā hiki ke ʻike ʻia ke ʻano e ka PCR.
Nānā:
Pono e hoʻonohonoho ʻia nā mana maikaʻi, ʻino/blank a me nā mana o loko no kēlā me kēia hoʻāʻo e loiloi i ka pono o nā hopena hoʻokolohua.
KaʻAnuʻu 3: Hoʻomākaukau hoʻokolohua
Ma mua o ka hoʻohana ʻana, e nānā inā ua hui like ka hopena.Inā loaʻa ka ua, pono e hoʻoheheʻe ʻia a hui pū ʻia e like me nā kuhikuhi ma mua o ka hoʻohana ʻana.Pono e paipu ʻia ka hui ʻana o 2×PCR a hui pinepine me kahi micropipette ma mua o ka hoʻohana ʻana i mea e pale ai i ka hāʻawi ʻana i ka ion.
Nānā:
E lawe i nā ʻōlelo aʻo a heluhelu pono iā lākou, a e hoʻomākaukau ma mua o ka hoʻokolohua e like me nā kuhikuhi.
KaʻAnuʻu Hana 4: E hoʻomākaukau i ka ʻōnaehana hana PCR
E like me ka protocol hoʻokolohua, hoʻohui i nā primers, H2O, 2×PCR hui, centrifuge a puunaue ia lakou i kela a me keia paipu hopena.
Nānā:
No ka hoʻāʻo nui a lōʻihi paha, ʻōlelo ʻia e hoʻohana i kahi ʻōnaehana hopena PCR i loaʻa i ka enzyme UNG, hiki ke pale maikaʻi i ka ʻino aerosol i hoʻokumu ʻia e nā huahana PCR.
KaʻAnuʻu Hana 5: E hoʻohui i ka hoʻohālikelike pane
Ke hoʻohana nei i ka ʻenehana PCR Direct, ʻaʻohe pono no ke kaʻina hoʻomaʻemaʻe nucleic acid.Hiki ke hoʻomākaukau ʻia ka laʻana laʻana i loko o 10 mau minuke a hoʻohui ʻia i ka ʻōnaehana hopena PCR pili.
Nānā:
ʻOi aku ka maikaʻi o ka ʻike ʻana o ke ʻano Lysis, a hiki ke hoʻohana ʻia ka huahana i loaʻa no nā hopena ʻike he nui.
5.1: PCR pololei o nā lau
E like me ka nui o ke kiʻi ma ka manual, e ʻoki i ka ʻiʻo lau me ke anawaena o 2-3mm a waiho i loko o ka PCR reaction system.
'Ōlelo Aʻo: E hōʻoia i ka hoʻokomo ʻia ʻana o nā ʻāpana lau i loko o ka solution reaction PCR, a mai hoʻohui i ka ʻiʻo lau nui.
5.2: Ke ala lysis lau
E ʻoki i ka ʻiʻo lau me ke anawaena o 5-7mm a waiho i loko o kahi paipu centrifuge.Inā koho ʻoe i nā lau oʻo, e ʻoluʻolu e hōʻole i ka hoʻohana ʻana i nā kiko o ka vein nui o ka lau.Pipette 50ul Buffer P1 lysate i loko o ka pahu centrifuge e hōʻoia e hiki i ka lysate ke hoʻokomo piha i ka ʻiʻo o ka lau, waiho i loko o kahi mea hoʻokele wela a i ʻole ka ʻauʻau metala, a lyse ma 95 ° C no 5-10 mau minuke.
Hoʻohui i ka 50ul Buffer P2 neutralization solution a hui maikaʻi.Hiki ke hoʻohana ʻia ka lysate hopena ma ke ʻano he laʻana a hoʻohui ʻia i ka ʻōnaehana hopena PCR.
'Ōlelo Aʻo: Pono ka nui o ka template ma waena o 5-10% o ka ʻōnaehana PCR, a ʻaʻole pono e ʻoi aku ma mua o 20% (no ka laʻana, ma kahi ʻōnaehana 20μl PCR, hoʻohui i 1-2μl o ka lysis buffer, ʻaʻole ʻoi aku ma mua o 4μl).
KaʻAnuʻu Hana 6: PCR Reaction
Ma hope o ka centrifuging i ka PCR reaction tube, e hoʻokomo iā lākou i loko o kahi mea hana PCR no ka hoʻonui.
Nānā:
Hoʻohana ka hopena i ka hoʻohālikelike hoʻomaʻemaʻe ʻole no ka hoʻonui ʻana, no laila ʻoi aku ka nui o nā pōʻai hoʻonui i 5-10 mau pōʻai ma mua o ka hoʻohana ʻana i ka template DNA maʻemaʻe.
KaʻAnuʻu Hana 7: Electrophoresis ʻike a me ka hoʻoponopono hopena
M:100bp DNA Ladder
1\4: Keʻano DNA hoʻomaʻemaʻe
2\5: Ke ala PCR pololei
3\6: Ka hoomalu hakahaka
Mana maikaʻi:
Pono nā hopena ho'āʻo o nā mana like ʻole i hoʻonohonoho ʻia i loko o ka hoʻokolohua e kūpono i kēia mau kūlana.A i ʻole, pono e nānā ʻia ke kumu o ka pilikia, a pono e hana hou ʻia ka hoʻāʻo ma hope o ka pau ʻana o ka pilikia.
Papa 1. Nā hopena ho'āʻo maʻamau o nā pūʻulu mana like ʻole
* Ke hoʻohana ʻia ka plasmid ma ke ʻano he mana maikaʻi, hiki i ka hopena hoʻāʻo gene endogenous ke hewa
Ka hopena o ka hoʻoholo:
A. ʻAʻole hiki ke unuhi ʻia ka DNA kūpono no ka ʻike PCR maʻamau mai ka hāpana a i ʻole ka DNA i unuhi ʻia i loko o ka PCR reaction inhibitors, a pono e unuhi hou ʻia ka DNA.
B. He maikaʻi ka hopena ho'āʻo o ka gene endogenous o ka hāpana, a ʻo ka hopena hoʻāʻo o ka exogenous gene he mea maikaʻi ʻole, e hōʻike ana i ka DNA kūpono no ka ʻike PCR maʻamau i unuhi ʻia mai ka hāpana, a hiki ke hoʻoholo ʻia ʻaʻole ʻike ʻia ka gene XXX i ka hāpana.
C. He maikaʻi ka hopena hoʻāʻo o ka gene endogenous o ka hāpana, a he maikaʻi ka hopena hoʻāʻo o ka gene exogenous, e hōʻike ana ua unuhi ʻia ka DNA kūpono no ka ʻike PCR maʻamau mai ka hāpana, a aia ka DNA hāpana i ka gene XXX.Hiki ke hoʻokō hou ʻia nā hoʻokolohua hōʻoia.
KaʻAnuʻu Hana 8: Hoʻolālā i nā kumu mua ʻike
Ma hope o ka hoʻokolohua, e hoʻohana i ka solution 2% sodium hypochlorite a me 70% solution ethanol e holoi i ka wahi hoʻokolohua e pale ai i ka pollution kaiapuni.
Pākuʻi
Papa 2. Hoʻohana mua ʻia no ka ʻike PCR maʻamau o nā mea kanu i hoʻololi ʻia
Palapala kuhikuhi:
SN/T 1202-2010, Qualitative PCR detection method for genetically modified plant ingredients in food.
'Ōlelo Hoʻolaha o ke Kuhina Mahiʻai 1485-5-2010, ʻO ka hoʻāʻo ʻana i nā mea kanu o nā mea kanu genetically modified a me kā lākou huahana-rice M12 a me kāna mau derivatives.
Ka manawa hoʻouna: Jun-09-2021
