ʻO ka hōʻoia ʻana i ka hana o nā primers a me nā probes i ka wā mua o ka PCR reagents a me ka hoʻoholo ʻana i nā kūlana hopena kūpono loa nā mea e pono ai e hōʻoia i ka holomua o nā hoʻokolohua maʻamau.
No laila pehea mākou e pono ai e hōʻoia i ka ʻimi mua i ka wā mua?
ʻO nā mea hōʻailona nui he baseline, amplification curve, ct value, amplification efficiency, low-concentration sample detection, CV, etc.
Kumukumu
ʻO ka baseline ka laina ākea i ka pihi hoʻonui PCR.I nā pōʻai mua o ka hoʻonui ʻana o ka PCR, ʻaʻole loli nui ka hōʻailona fluorescence a hana i kahi laina pololei.ʻO kēia laina pololei ke kumu.
I ka nānā ʻana i nā probes PCR primer, e nānā i ka pae o ka pae.ʻO ka maʻemaʻe o ka ʻimi noiʻi kumu e hoʻopilikia i ka baseline, e like me ke kumu e piʻi ai a hāʻule paha.ʻO ka baseline kahi hōʻailona intuitive loa.
ʻĀpana hoʻonui
ʻO kekahi hōʻailona intuitive ʻo ke ʻano o ka pihi hoʻonui.ʻOi aku ka maikaʻi o ka loaʻa ʻana o ka pihi S-like e pale aku i ka hoʻonui lua a i ʻole nā pihi hoʻonui ʻē aʻe.
Ct Waiwai
ʻO ka helu o nā pōʻaiapili e pili ana i ka helu inflection mai ka papa kuhikuhi a hiki i ka ulu exponential ka waiwai Ct.
No ka laʻana like, ʻokoʻa nā ʻimi noiʻi kumu i nā ʻāpana hoʻonui like ʻole, a e hoʻopili ʻia ka waiwai Ct e pili ana i ka maikaʻi o ka amplification a me ke degere interference.Ma ke kumumanaʻo, ʻoi aku ka liʻiliʻi o ka waiwai Ct o ka probe primer a mākou e koho ai, ʻoi aku ka maikaʻi.
Hoʻonui i ka pono
ʻO kekahi o nā ʻano hilinaʻi a paʻa loa no ka loiloi ʻana i ka pono o ka hoʻonui ʻana i ka PCR ʻo ia ka pihi maʻamau, a ʻike nui ʻia e nā mea noiʻi.ʻO ke kaʻina hana ka hana ʻana i nā ʻano laʻana no ka hoʻomalu ʻana i ka helu pili o nā laʻana.Hana ʻia kēia mau laʻana e nā hoʻoheheʻe serial o nā hoʻonā stock concentrated, ʻo ka mea maʻamau i hoʻohana ʻia he 10-fold dilution.Ke hoʻohana nei i ka moʻo o nā laʻana i hoʻoheheʻe ʻia, me ka hoʻohana ʻana i ka papahana qPCR maʻamau e hoʻonui i ka loaʻa ʻana o ka waiwai Cq, a hope e huki i kahi pihi maʻamau e like me ka neʻe ʻana o kēlā me kēia hāpana a me ka waiwai Cq pili e loaʻa ai ka hoohalike linear Cq= -klgX0+b, a me ka pono hoʻonui E=10(-1 /k) -1.Ke hoʻohana nei i ka qPCR no ka nānā ʻana i ka quantitative, pono ka hoʻonui ʻana i ka pono ma waena o 90% -110% (3.6>k>3.1).
Haʻahaʻa-concenter laʻana 'ike
Ke haʻahaʻa ka hoʻohālikelike ʻana, ʻokoʻa nā helu ʻike o nā probes primer like ʻole.Koho mākou i 20 mau laʻana haʻahaʻa haʻahaʻa e hoʻopili hou, a ʻo ka ʻōnaehana hoʻonaʻauao mua me ka helu kiʻekiʻe o ka ʻike ʻoi aku ka maikaʻi.
Coefficient of Variation (CV)
Hiki ke ʻike ʻia he 10 mau laʻana like ʻole me nā probes primer ʻokoʻa e like me ka laina laina o ka reagent no ka ʻike hoʻonui ʻana i ka waikawa nucleic.
Nā mea hoʻopaʻa helu helu:
Ka pololei
Pono e hui ka pololei i loko o hoʻokahi pūʻulu: ʻo ka coefficient o ka hoʻololi (CV,%) o ka waiwai logarithmic o ka hoʻāʻo ʻana he ≤5%.I ka haʻahaʻa ʻana o ka laʻana, ʻo ka coefficient o ka hoʻololi ʻana (CV,%) o ka logarithm o ka ʻike ʻike he ≤10%
ʻO nā mea hoʻonā kūpono:
Ka pololei
Pono ka pololei i loko o ka pūʻulu hoʻokahi:
(1) Coefficient o ka hoʻololi o ka waiwai Ct (CV,%) ≤5%
Hoʻāʻo like ʻia ka laʻana like no 10 mau manawa, a pono e kūlike nā hopena hōʻike
Ka manawa hoʻouna: Sep-18-2021
