Ke manaʻoʻiʻo nei au e loaʻa mau ana kēlā me kēia pilikia i ka wā e hana ai i nā hopena PCR, akā hiki ke hoʻokaʻawale ʻia ka hapa nui o lākou i ʻelua pilikia nui:

ʻAʻole liʻiliʻi ka hoʻonui ʻana i ke ʻano gene template (amplification);
ʻOi aku ka nui o ka hoʻonui ʻia ʻana o nā genes.
ʻO ka hoʻohana ʻana i nā additives kekahi o nā hoʻolālā maʻamau e hoʻoponopono i kēia mau pilikia.ʻO ka maʻamau ka hana o nā additives i ʻelua mau ʻano:
hale luao nā genes (ke kumu lua);
E ho'ēmi i ka priming kikoʻī ʻole.
I kēia lā, e hoʻolauna pōkole ka mea hoʻoponopono iā ʻoe i nā mea hoʻohui maʻamau i nā hopena PCR a me kā lākou mau hana.
ʻO nā mea hoʻohui e hōʻemi i ka hana lua
sulfoxide(DMSO)
gene samplesme ka maʻiʻo GC kiʻekiʻe.Eia naʻe, hoʻemi nui ka DMSO i ka hana Taq polymerase.No laila, pono i kēlā me kēia kanaka ke kaulike i ka hiki ke komo i ka template a me ka hana o ka polymerase.Manaʻo ka mea hoʻoponopono e hiki iā ʻoe ke hoʻāʻo i nā ʻano ʻokoʻa like ʻole o DSMO, e like me ka 2% a hiki i ka 10%, e ʻike i ka ʻike e kūpono i kāu hoʻokolohua.
ʻO nā mea hoʻomaʻemaʻe non-ionic
ʻO nā mea hoʻomaʻemaʻe non-ionic, e like me 0.1-1% Triton X-100, Ma waena o 20 a i ʻole NP-40, maʻamau e hoʻemi i ka hana lua DNA.ʻOiai hiki i kēia ke hoʻonui i ka hoʻonui ʻana o ka gene template, e hoʻopilikia pū ai i ka hoʻonui ʻole ʻia.No laila, hana maikaʻi kēia mau mea hoʻohui no nā hopena PCR haʻahaʻa me ka ʻole o ka ʻōpala, akā ʻaʻole maikaʻi no nā hopena PRC maʻemaʻe.ʻO kahi pōmaikaʻi ʻē aʻe o nā mea hoʻomaʻemaʻe non-ionic ʻo ka hōʻemi ʻana i ka hoʻohaumia SDS.ʻO ka maʻamau i ka wā o ke kaʻina hoʻoiho DNA, e lawe ʻia ʻo SDS i ka pae PCR, kahi e pale nui ai i ka hana o ka polymerase.No laila, hiki i ka hoʻohui ʻana i ka 0.5% Tween-20 a i ʻole Tween-40 i ka hopena ke hoʻopau i nā hopena maikaʻi ʻole o SDS.
Betaine_
Hiki i ka Betaine ke hoʻomaikaʻi i ka hoʻonui ʻana i ka DNA ma o ka hōʻemi ʻana i ka hoʻokumu ʻia ʻana o ka hale kiʻekiʻe a ʻo ia ka mea "pohihihi" i hoʻohui ʻia i nā pahu PCR pāʻoihana.Inā makemake ʻoe e hoʻohana i ka betaine, pono ʻoe e hoʻokomo i ka betaine a i ʻole betaine mono-hydrate (Betaine a i ʻole Betaine mono-hydrate), akā ʻaʻole ka betaine hydrochloride (Betaine HCl), e hoʻololi i ka hopena hope o 1-1.7M.Hiki nō hoʻi i ka Betaine ke kōkua i ka hoʻomaikaʻi ʻana i ka kikoʻī no ka mea e hoʻopau ana i ka hilinaʻi o ka hoʻoheheʻe ʻana o DNA/DNA denaturation.
Nā mea hoʻohui e hōʻemi i ka priming kikoʻī ʻole
Formamide
ʻO Formamide kahi mea hoʻohui PCR organik i hoʻohana pinepine ʻia.Hiki iā ia ke hui pū me ke awāwa nui a me ke awāwa liʻiliʻi i ka DNA, a laila e hōʻemi i ka paʻa o ka master DNA double helix a hoʻohaʻahaʻa i ka wela hoʻoheheʻe o DNA.ʻO ka manaʻo o ka formamide i hoʻohana ʻia i nā hoʻokolohua PCR he 1% -5%.
Tetramethylammonium chloride( TMAC)
Hiki i ka Tetramethylammonium chloride ke hoʻonui i ke kiko o ka hybridization (hybridization specificity) a hoʻonui i ka wela hoʻoheheʻe o DNA.No laila, hiki i ka TMAC ke wehe i ka priming kikoʻī ʻole a hōʻemi i ka misbinding o DNA a me RNA.Inā hoʻohana ʻoedegenerate primersi ka hopena PCR, e hoʻomanaʻo e hoʻohui i ka TMAC, ka mea maʻamau i hoʻohana ʻia ma ke ʻano o 15-100mM.
Nā mea hoʻohui maʻamau ʻē aʻe
Ma waho aʻe o nā ʻāpana ʻelua o nā mea hoʻohui i ʻōlelo ʻia ma luna nei, he nui nā mea hoʻohui maʻamau i nā hopena PCR, ʻoiai he mau hana like ʻole lākou, he mea nui loa lākou.
ʻIona Magnesium
ʻO ka Magnesium ion he cofactor (cofactor) koʻikoʻi o ka polymerase, ʻo ia hoʻi, me ka ʻole o ka magnesium, ʻaʻole hana ka polymerase.Eia naʻe, hiki i ka nui o nā iona magnesium ke hoʻopilikia i ka pono o ka polymerase.E ʻokoʻa ka neʻe ʻana o nā ion magnesium i kēlā me kēia pane PCR.ʻO nā mea hana chelating (e like me EDTA a i ʻole citrate), ke ʻano o nā dNTP a me nā protein e pili ana i ka neʻe ʻana o nā ion magnesium.No laila, inā pilikia ʻoe i kāu hoʻokolohua PCR, hiki iā ʻoe ke hoʻāʻo e hoʻololi i nā manaʻo ion magnesium like ʻole, no ka laʻana, mai 1.0 a i 4.0mM, me kahi manawa o 0.5-1mM ma waena.
Pono e hoʻomaopopo ʻia hiki i nā pōʻai maloʻo maloʻo he nui ke alakaʻi i ka stratification kukū o ka solution magnesium chloride.No laila, pono ʻoe e hoʻopau loa ma mua o kēlā me kēia hoʻohana ʻana, a hui maikaʻi ma mua o ka hoʻohana ʻana.
Bovine serum albumin(Bovine albumin, BSA)
I loko o nā hoʻokolohua kemika molekala, he mea hoʻohui maʻamau ka bovine serum albumin, ʻoi aku hoʻi i ka hoʻāʻo ʻana i ka enzyme restriction a me nā hoʻokolohua PCR.Ma nā hopena PCR, kōkua ʻo BSA i ka hōʻemi ʻana i nā mea haumia e like me nā pūhui phenolic.A ua ʻōlelo ʻia hoʻi hiki iā ia ke hōʻemi i ka hoʻopili ʻana o nā reactants i ka paia o ka paipu hōʻike.I ka hopena PCR, maʻamau ka manaʻo o ka BSA i hoʻohui ʻia hiki ke hiki i 0.8 mg/ml.
 
Nā huahana pili:
PCR Hero(me ka waihoʻoluʻu)
PCR Hero