ʻO ka nalo lohe (HL) ka maʻi maʻamau o ke kanaka.Ma nā ʻāina i kūkulu ʻia, ma kahi o 80% o nā hihia kuli prelingual i nā keiki ma muli o nā kumu genetic.ʻO ka mea maʻamau, ʻo nā hemahema hoʻokahi-gene (e like me ka mea i hōʻike ʻia ma ka Fig. 1), ua ʻike ʻia nā mutation gene 124 e pili pū ana me ka nalo o ka lohe nonsyndromic i loko o ke kanaka, ʻo ke koena ke kumu o nā kumu kūlohelohe.ʻO kahi implant cochlear (kahi mea uila i hoʻokomo ʻia i loko o ka pepeiao i loko e hāʻawi pono ai i ka hoʻoulu uila i ke aʻalolo auditory) ʻo ia ke koho kūpono loa no ka mālama ʻana i ka HL koʻikoʻi, aʻo ke kōkua hoʻolohe (he mea uila waho e hoʻololi a hoʻonui i nā hawewe kani) hiki ke kōkua i nā poʻe maʻi me ka HL haʻahaʻa.Eia naʻe, ʻaʻohe lāʻau i loaʻa i kēia manawa no ka mālama ʻana i ka HL (GHL).I kēia mau makahiki i hala iho nei, ua hoʻonui ʻia ka manaʻo o ka gene therapy ma ke ʻano he ala hoʻohiki e mālama ai i ka hana ʻole o ka pepeiao.

Fig1.Ka mahele ʻana o ke ʻano hoʻololi pili kuli.[1]

I kēia mau lā, ua paʻi nā ʻepekema mai ka Salk Institute a me ke Kulanui o Sheffield i kahi hopena noiʻi ma Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], i hōʻike i nā manaʻo noiʻi ākea no ka in vivo gene therapy of hereditary deafness.Ua ʻōlelo ʻo Uri Manor, ke kaukaʻi noiʻi kōkua ma ka Salk Institute a me ka luna o ka Waitt Center for Advanced Biophotonics, ua hānau ʻia ʻo ia me ka nalo nui o ka lohe a manaʻo ʻo ia he makana maikaʻi loa ka hoʻihoʻi ʻana i ka lohe.Ua ʻike ʻia kāna noiʻi mua ʻana ʻo Eps8 he protein regulatory actin me nā hana hoʻopaʻa a me nā hana capping;i loko o ka lauoho lauoho cochlear, ʻo ka protein complex i hoʻokumu ʻia e Eps8 me MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 a me GNAI3 ka mea nui i ka nui ʻO nā ʻōlelo aʻoaʻo o ka lōʻihi stereocilia, kahi me MYO15A localize BAIAP2L2 ma nā kihi o ka stereocilia pōkole, koi ʻia no ka mālama ʻana i nā pūpū lauoho.No laila, hiki i ka Eps8 ke hoʻoponopono i ka lōʻihi o ka stereocilia o nā pūpū lauoho, he mea nui ia no ka hana lohe maʻamau;ʻO ka holoi ʻana a i ʻole ka hoʻololi ʻana o Eps8 e alakaʻi i ka stereocilia pōkole, kahi e hiki ʻole ai ke hoʻololi pono i ke kani i nā hōʻailona uila no ka ʻike o ka lolo, a laila e alakaʻi ai i ke kuli..I ka manawa like, ua ʻike ʻo Walter Marcotti, he kumu aʻoaʻo ma ke Kulanui o Sheffield, ʻaʻole hiki ke hoʻomohala maʻamau nā sela lauoho me ka loaʻa ʻole o Eps8.Ma kēia haʻawina, ua hui pū ʻo Manor lāua ʻo Marcotti e noiʻi inā hiki i ka hoʻohui ʻana i ka Eps8 i nā cell stereociliary ke hoʻihoʻi i kā lākou hana a, ʻo ia hoʻi, e hoʻomaikaʻi i ka lohe ʻana i nā ʻiole.Ua hoʻohana ka hui noiʻi i ka adeno-associated virus (AAV) vector Anc80L65 no ka hoʻopuka ʻana i ke kaʻina coding e loaʻa ana i ka EPS8 ʻano ʻāhiu i loko o ka cochlea o Eps8-/- nā ʻiole P1-P2 hānau hou ma o ka hoʻoheheʻe ʻia ʻana o ka membrane puka aniani;i loko o nā pūnae lauoho cochlear iole Ua hoʻoponopono ʻia ka hana o stereocilia ma mua o ko lākou oʻo ʻana;a ua ʻike ʻia ka hopena hoʻoponopono e ka ʻenehana kiʻi kiʻi a me ke ana o stereocilia.Ua hōʻike ʻia nā hopena ua hoʻonui ʻo Eps8 i ka lōʻihi o ka stereocilia a hoʻihoʻi hou i ka hana o ka lauoho lauoho i nā kelepona haʻahaʻa haʻahaʻa.Ua ʻike pū nō hoʻi lākou, i ka hala ʻana o ka manawa, ua nalowale nā ​​​​pūnaewele i ko lākou hiki ke hoʻopakele ʻia e kēia gene therapy.ʻO ka manaʻo, pono e mālama ʻia kēia lapaʻau i loko o ka ʻōpū, no ka mea, ua oʻo a hōʻiliʻili ʻia paha nā pōʻino o Eps8-/- lauoho ma hope o ka hānau ʻana o nā ʻiole."He protein ka Eps8 me nā hana like ʻole, a he nui nā mea e ʻimi ai," wahi a Manor.E komo ana ka noiʻi e hiki mai ana i ka noiʻi ʻana i ka hopena o ka Eps8 gene therapy i ka hoʻihoʻi ʻana i ka lohe ma nā pae hoʻomohala like ʻole, a inā paha hiki ke hoʻolōʻihi i nā manawa lapaʻau.ʻO Coincidentally, i Nowemapa 2020, ua paʻi ʻo Professor KarenB Avraham o ke Kulanui ʻo Tel Aviv ma Israel i kāna mau hopena ma ka puke pai EMBO Molecular Medicine [3], me ka hoʻohana ʻana i kahi ʻenehana hoʻomaʻamaʻa gene no ka hana ʻana i kahi maʻi synthetic adeno-associated virus AAV9-PHP.B, Ua hoʻoponopono ʻia ka gene defect i loko o ka lauoho o Syne4-/- mice ma ka hoʻokomo ʻana i kahi maʻi e lawe ana i ke kaʻina coding o Syne4 i loko o ka pepeiao o loko o nā ʻiole, e ʻae iā ia e komo i loko o ka lauoho lauoho a hoʻokuʻu i nā mea genetic i lawe ʻia, e ʻae iā lākou e oʻo a hana maʻamau (e like me ka Fig. 2).

Fig2.Hōʻike schematic o ka anatomy pepeiao i loko, me ka nānā ʻana i ke kino o Corti a me ka hana kelepona o nesprin-4.

Hiki ke ʻike ʻia ʻo ka hoʻohana ʻana i ka gene therapy no ka hoʻokō ʻana i ke kumu o ka mālama ʻana i nā maʻi hoʻoilina ma ka pae gene ma o ka hoʻokomo ʻana, wehe a hoʻoponopono ʻana paha i nā genes mutated no ka mālama ʻana (ʻo ia hoʻi, ka hoʻomalu ʻana i nā loli genetic i ka maʻi) he hopena koʻikoʻi kiʻekiʻe.nā manaʻo noiʻi.Hiki ke hoʻokaʻawale ʻia nā ʻano hana lāʻau lapaʻau o kēia manawa no ke kuli kīnā genetically i kēia mau ʻāpana:

pani gene

ʻO ka hoʻololi ʻana i ke ʻano he ʻano "pololei" loa o ka lāʻau lapaʻau, e pili ana i ka ʻike ʻana a me ka hoʻololi ʻana i kahi ʻano kīnā ʻole me kahi kope maʻamau a ʻano hihiu paha o ka gene.ʻO ka hoʻopaʻa haʻawina mua loa i loko o ka pepeiao gene therapy no ka nalo ʻana ma muli o ka holoi ʻia ʻana o ka gene vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3);AAV1-mediated delivery of exogenous VGLUT3 overexpression in inner ear hair cell cell (IHCs) Hiki ke hopena i ka hoʻōla hoʻomau ʻana o ka lohe, ka hoʻihoʻi ʻana o ka ribbon synaptic morphology, a me nā pane convulsive [4].Eia nō naʻe, i loko o nā laʻana me nā mea hoʻololi ʻelua i hāʻawi ʻia e AAV i hōʻike ʻia ma ka hoʻomaka ʻana ma luna, he mea nui e hoʻomaopopo i nā ʻano kiʻi ʻiole i hoʻohana ʻia no kekahi ʻano o ka hoʻopau ʻana i ka gene deletion hereditary hoʻolohe nalo he ʻokoʻa i ke kanaka, a ma nā ʻiole P1, aia ka pepeiao i loko o ka pae oʻo o ka ulu ʻana.ʻO ka ʻokoʻa, hānau ʻia ke kanaka me ka pepeiao o loko.Kāohi kēia ʻokoʻa i ka hoʻohana ʻana i nā hopena ʻiole i ka mālama ʻana i nā maʻi kuli hoʻoilina o ke kanaka ke ʻole e hāʻawi ʻia ka lāʻau lapaʻau i nā pepeiao ʻiole makua.

Hoʻoponopono Gene: CRISPR/Cas9

Ke hoʻohālikelike ʻia me ka "gene replacement", ʻo ka hoʻomohala ʻana i ka ʻenehana hoʻoponopono gene i lawe mai i ka wanaʻao o ka mālama ʻana i nā maʻi genetic mai ke aʻa.ʻO ka mea nui, ʻo ke ʻano hoʻoponopono gene e hoʻoponopono ai i nā hemahema o nā ʻano hana overexpression gene therapy i kūpono ʻole no nā maʻi kuli hoʻoilina hoʻoilina, a me ka pilikia ʻaʻole lōʻihi ke ʻano overexpression.Ma hope o ka hoʻokuʻu pono ʻana o nā mea noiʻi Kina i ka Myo6C442Y mutant allele i Myo6WT/C442Y mice me ka hoʻohana ʻana i ka ʻōnaehana hoʻoponopono gene AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, a i loko o 5 mau mahina o ka knockout, nā ʻiole Ua hoʻihoʻi ʻia ka hana auditory o ke kŘkohu;i ka manawa like, ua ʻike pū ʻia ka hoʻomaikaʻi ʻana o ke ola o nā cell lauoho i loko o ka pepeiao i loko, ua lilo ke ʻano o ka cilia maʻamau, a ua hoʻoponopono ʻia nā hōʻailona electrophysiological [5].ʻO kēia ka noiʻi mua ma ka honua e hoʻohana i ka ʻenehana CRISPR/Cas9 no ka mālama ʻana i ke kuli hoʻoilina i hoʻokumu ʻia e Myo6 gene mutation, a he holomua noiʻi koʻikoʻi o ka ʻenehana hoʻoponopono gene no ka mālama ʻana i ke kuli hoʻoilina.Hāʻawi ka unuhi lapaʻau o ka lapaʻau i kahi kumu ʻepekema paʻa.

ʻO nā ʻano hana hāʻawi Gene therapy

I mea e kūleʻa ai ka lāʻau lapaʻau, ʻaʻole hiki i nā molekala DNA huna ke komo pono i nā cell ma muli o kā lākou hydrophilicity a me ka hoʻopiʻi maikaʻi ʻole o nā pūʻulu phosphate, a no ka hōʻoia ʻana i ka pono o nā molekole nucleic acid i hoʻohui ʻia, pono e koho ʻia kahi ala palekana a maikaʻi.Hāʻawi ʻia ka DNA i hoʻohui ʻia i ka cell target a i ʻole ka ʻiʻo.Hoʻohana nui ʻia ʻo AAV ma ke ʻano he kaʻa lawe no ka mālama ʻana i nā maʻi ma muli o kona hopena infectious kiʻekiʻe, immunogenicity haʻahaʻa, a me ka tropism ākea i nā ʻano kikoʻī.I kēia manawa, ua hoʻoholo ka nui o ka hana noiʻi i ka tropism o nā ʻano ʻano like ʻole o AAV e pili ana i nā ʻano cell like ʻole i loko o ka cochlea ʻiole.Me ka hoʻohana ʻana i nā hiʻohiʻona hāʻawi AAV i hui pū ʻia me nā mea hoʻolaha kikoʻī kelepona hiki ke hoʻokō i ka ʻōlelo kikoʻī cell-specific, hiki ke hōʻemi i nā hopena o waho.Eia kekahi, ma ke ʻano he ʻokoʻa i nā vectors AAV kuʻuna, hoʻomohala mau ʻia nā vectors AAV synthetic hou a hōʻike i ka mana transduction kiʻekiʻe i loko o ka pepeiao i loko, ʻo ia ka AAV2/Anc80L65 i hoʻohana nui ʻia.Hiki ke hoʻokaʻawale hou ʻia nā ʻano hana hoʻopuka non-viral i nā ʻano kino (microinjection a me electroporation) a me nā ʻano kemika (lipid-based, polymer-based, a me nā nanoparticles gula).Ua hoʻohana ʻia nā ala ʻelua i ka mālama ʻana i nā maʻi kuli hoʻoilina a ua hōʻike i nā pono like ʻole a me nā palena.Ma waho aʻe o ka kaʻa lawe ʻana no ka gene therapy ma ke ʻano he kaʻa, hiki ke hoʻohana ʻia nā ala like ʻole no ka hoʻokele gene in vivo e pili ana i nā ʻano cell target like ʻole, nā ala o ka hoʻokele ʻana, a me ka hopena therapeutic.ʻO ke ʻano paʻakikī o ka pepeiao i loko ka mea paʻakikī i ka hiki ʻana i nā cell target a lohi ka puʻunaue o nā mea hoʻoponopono genome.Aia ka labyrinth membranous i loko o ka labyrinth iwi o ka iwi kino a ua komo pū me ka duct cochlear, duct semicircular, utricle, a me ka baluna.ʻO kona hoʻokaʻawale ʻana, ka liʻiliʻi o ka lymphatic circulation, a me ka hoʻokaʻawale ʻana mai ke koko e kahi pale koko-maze e kaupalena ʻia ka hāʻawi ʻana o nā lāʻau lapaʻau i nā ʻiole neonatal wale nō.No ka loaʻa ʻana o nā titers viral kūpono no ka lāʻau lapaʻau, pono ke hoʻokomo pololei ʻana i nā vectors viral i loko o ka pepeiao i loko.ʻO nā ala i hoʻopaʻa ʻia e hoʻokomo ʻia he [6]: (1) puni puka aniani (RWM), (2) tracheostomy, (3) endolymphatic a perilymphatic cochleostomy, (4) puni puka aniani me ka Tube fenestration (CF) (e like me ka Fig. 3).

Fig3.Hāʻawi ka pepeiao i loko o ka lāʻau lapaʻau gene.

ʻOiai ua nui nā holomua i hana ʻia i ka lāʻau lapaʻau, e pili ana i nā pahuhopu unuhi lapaʻau, pono e hana hou ʻia ka hana ma mua o ka lilo ʻana o ka lāʻau lapaʻau i mea koho mua no ka poʻe maʻi me nā maʻi genetic, ʻoi aku hoʻi i ka hoʻomohala ʻana i nā vectors palekana a maikaʻi a me ke ʻano o ka lawe ʻana.Akā ke manaʻoʻiʻo nei mākou i ka wā e hiki mai ana, e lilo kēia mau ʻano lapaʻau i mea koʻikoʻi o ka lāʻau lapaʻau pilikino a loaʻa ka hopena maikaʻi loa i ke ola o nā poʻe me nā maʻi genetic a me ko lākou mau ʻohana.

Ua hoʻokumu pū ʻo Foregene i kahi kit screening kiʻekiʻe no nā genes i hoʻopaʻa ʻia, ʻo ia ka wikiwiki a hiki ke hana i ka transcription reverse a me nā pane qPCR me ka ʻole o ka RNA extraction.

Nā loulou Huahana

Pūnaewele Direct RT-qPCR kit—Taqman/SYBR GREEN I

No ka 'ike hou aku o ka huahana, e 'olu'olu e leka uila:

overseas@foregene.com