ʻO ka waiwai Ct ka ʻano hōʻike hopena koʻikoʻi loa o ka PCR quantitative fluorescent.Hoʻohana ʻia ia no ka helu ʻana i nā ʻokoʻa hōʻike gene a i ʻole ka helu kope gene.No laila he aha ka waiwai Ct o ka helu fluorescence i manaʻo ʻia he kūpono?Pehea e hōʻoia ai i ka laulā kūpono o ka waiwai Ct?

He aha ka Ct Value?
I loko o ke kaʻina hana hoʻonui qPCR, ʻo ka helu kūpono o nā pōʻai hoʻonui (Cycle Threshold) i ka wā e hiki ai ka hōʻailona fluorescence o ka huahana hoʻonui i ka paepae fluorescence i hoʻonohonoho ʻia.ʻO C no Cycle a ʻo T no ka paepae.ʻO ka waiho wale ʻana, ʻo ka waiwai Ct ka helu o nā pōʻaiapili e pili ana i ka wā i hiki ai ka hoʻonui ʻia ʻana o ka template mua i kahi nui o ka huahana ma qPCR.ʻO ka mea i kapa ʻia "kahi nui o ka huahana" e wehewehe hou ʻia ma hope.

He aha ka hana o ka waiwai Ct?

1. ʻO ka pilina ma waena o ka hoʻonui exponential, ka nui template a me ka waiwai Ct
ʻO ke kūpono, hōʻiliʻili ʻia nā genes i ka qPCR e ka hoʻonui exponential ma hope o kekahi helu o nā pōʻai.ʻO ka pilina ma waena o ka helu o nā pōʻai hoʻonui a me ka nui o nā huahana: ʻO ka nui o nā huahana i hoʻonui ʻia = ka nui o ka hoʻohālikelike mua × (1+En) helu pōʻai.Eia naʻe, ʻaʻole i nā manawa a pau ka pane qPCR i kahi kūlana kūpono.Ke piʻi ka nui o ka huahana i hoʻonui ʻia i kahi "nui huahana", ʻo ka helu o nā pōʻai i kēia manawa ka waiwai Ct, a aia ia i ka manawa hoʻonui exponential.ʻO ka pilina ma waena o ka waiwai Ct a me ka nui o ka hoʻomaka ʻana: Aia kahi pilina laina ma waena o ka waiwai Ct o ka template a me ka logarithm o ka helu kope hoʻomaka o ka template.ʻO ke kiʻekiʻe o ke kumu hoʻohālike mua, ʻoi aku ka liʻiliʻi o ka waiwai Ct;ʻo ka haʻahaʻa o ke kumu hoʻohālike mua, ʻoi aku ka nui o ka waiwai Ct.

2.Amplification curve, fluorescence threshold a me kekahi helu huahana PCR
Hōʻike pololei ʻia ka nui o ka huahana amplification qPCR ma ke ʻano o ka hōʻailona fluorescent, ʻo ia hoʻi, ka pihi hoʻonui.I ka hoʻomaka ʻana o ka PCR, aia ka amplification ma lalo o nā kūlana kūpono, liʻiliʻi ka helu o nā pōʻai, liʻiliʻi ka hōʻiliʻili huahana, a ʻaʻole hiki ke hoʻokaʻawale ʻia ke kiʻekiʻe o ka fluorescence mai ke ʻano o ka fluorescence.Ma hope o kēlā, hoʻonui ka fluorescence a komo i ka māhele exponential.Hiki ke ʻike ʻia ka nui o ka huahana PCR i kekahi manawa i ka manawa o ka hopena PCR aia wale nō i ka manawa exponential, hiki ke hoʻohana ʻia ma ke ʻano he "nui o ka huahana", a hiki ke unuhi ʻia ka ʻike mua o ka template mai kēia.No laila, ʻo ka hōʻailona hōʻailona fluorescence e pili ana i kekahi nui o ka huahana ka paepae fluorescence.

I ka hopena hope o ka PCR, ʻaʻole hōʻike hou ka pihi hoʻonui i ka hoʻonui exponential, a komo i ka pae laina a me ka pae plateau.

3.Reproducibility o Ct waiwai
Ke hiki ka pōʻai PCR i ka helu pōʻai o ka waiwai Ct, ua komo wale ia i ka manawa hoʻonui exponential maoli.I kēia manawa, ʻaʻole i hoʻonui ʻia ka hapa liʻiliʻi, no laila ʻoi aku ka maikaʻi o ka reproducibility o ka waiwai Ct, ʻo ia hoʻi, ua hoʻonui ʻia ka template like i nā manawa like ʻole a i ʻole i nā paipu like ʻole i ka manawa like.Hoʻonui, ʻo ka waiwai Ct i loaʻa mau.

1.Amplification maikaʻi En
ʻO ka maikaʻi o ka PCR amplification e pili ana i ka pono e hoʻololi ai ka polymerase i ka gene e hoʻonui ʻia i amplicon.ʻO ka hana hoʻonui i ka wā e hoʻololi ʻia ai kahi mole DNA i ʻelua mau mole DNA he 100%.Hōʻike pinepine ʻia ka maikaʻi o ka amplification e like me En.I mea e maʻalahi ai ka nānā ʻana o nā ʻatikala ma hope, ua hoʻopuka pōkole ʻia nā mea e pili ana i ka pono amplification.

2. Range o nā waiwai Ct
Loaʻa nā helu Ct mai 15-35.Inā emi ka waiwai Ct ma mua o 15, ua manaʻo ʻia aia ka amplification i loko o ka palena o ka wā kumu a ʻaʻole i hiki i ka paepae fluorescence.ʻO ka mea kūpono, aia kahi pilina laina ma waena o ka waiwai Ct a me ka logarithm o ka helu kope mua o ka template, ʻo ia hoʻi, ka pihi maʻamau.Ma o ka pihi maʻamau, inā he 100% ka hoʻonui ʻana, ʻo ka helu Ct i helu ʻia no ka helu ʻana i ka helu kope hoʻokahi o ka gene ma kahi o 35. Inā ʻoi aku ia ma mua o 35, ʻoi aku ka nui o ka helu kope mua o ka template ma mua o 1, hiki ke manaʻo ʻia he mea ʻole.

No nā pae gene Ct ʻokoʻa, ma muli o ka ʻokoʻa o ka helu kope gene a me ka hoʻonui ʻana i ka hoʻonui ʻana i ka nui template mua, pono e hana i kahi pihi maʻamau no ka gene a helu i ka laina ʻike laina o ka gene.

3. Hoʻopili i nā kumu o ka waiwai Ct
Mai ka pilina ma waena o ka helu o nā pōʻai hoʻonui a me ka nui o ka huahana: ka nui o ka huahana i hoʻonui ʻia = ka nui o ka helu pōʻaiapili mua × (1+En), hiki ke ʻike ʻia ma lalo o nā kūlana kūpono, ʻo ka nui o ka template mua a me En ka hopena maikaʻi ʻole i ka waiwai Ct.ʻO ka ʻokoʻa o ka maikaʻi o ka laʻana a i ʻole ka hoʻonui ʻana i ka maikaʻi e lilo ai ka waiwai Ct i mea nui a liʻiliʻi paha.

4. He nui a liʻiliʻi paha ka waiwai Ct