Mīkini PCR|Maopopo maoli ʻoe?

ʻenehana PCR lanakila no ka Nobel Prize

I ka makahiki 1993, ua loaʻa i ka ʻepekema ʻAmelika ʻo Mulis ka makana no ka Nobel ma ke kemika, a ʻo kāna hoʻokō ʻana ʻo ia ka mea i hoʻokumu ʻia i ka ʻenehana PCR.ʻO ke kilokilo o ka ʻenehana PCR aia i loko o kēia mau hiʻohiʻona: ʻO ka mea mua, ʻo ka nui o ka DNA e hoʻonui ʻia he liʻiliʻi loa, a ma ka manaʻo hiki ke hoʻohana ʻia hoʻokahi mole no ka hoʻonui ʻana;ʻO ka lua, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hoʻonui ʻana, a ʻo ka nui o ka gene i manaʻo ʻia he exponential.Hoʻonui, ʻoi aku ma mua o 10 miliona mau manawa i loko o kekahi mau hola.I kēia manawa ua hoʻohana nui ʻia ka mea hana PCR i ka noiʻi ʻepekema ola a me nā ʻano ʻē aʻe he nui.

Hiki ke hōʻike ʻia nā ʻano hoʻohālike like ʻole a me nā mea hana o nā kaʻa uila wela.ʻAʻole pili kēia mau ʻokoʻa i ka pono PCR wale nō akā i ka pololei a me ke kūlike o ka ʻikepili i loaʻa.ʻO ka hoʻomaopopo ʻana i nā hiʻohiʻona mīkini PCR hiki ke kōkua iā mākou e hoʻonui i ka kūleʻa o kā mākou hoʻokolohua.

Module hoʻomehana

Hiki ke hoʻoholo i ka pololei o ka mahana o ka mea hoʻokele wela no ka holomua a i ʻole ka hemahema o PCR.He mea koʻikoʻi nō hoʻi ke kūpaʻa ʻana o ka wela maikaʻi a me ka pūnāwai no ka loaʻa ʻana o nā hopena PCR hilinaʻi a hiki ke hana hou ʻia.

ʻO kahi ala e hōʻoia ai i ka pololei o ka wela, ʻo ia ka hoʻāʻo pinepine ʻana me ka hoʻohana ʻana i nā pahu hōʻoia wela a hoʻoponopono hou e like me ka mea e pono ai e kahi loea i aʻo ʻia.Hoʻohana mau ʻia nā hoʻokolohua hōʻoia wela i:

ʻO ka pololei a me ka pūnāwai pili i ka hoʻonohonoho ʻana i ka mahana ma ke ʻano isothermal

ʻO ka pololei a me ka pūnāwai pili i ka hoʻonohonoho ʻana i ka mahana ma hope o ka hoʻololi ʻana i ka mahana

Pono ka wela o ka uhi wela

ʻO ka hoʻomalu ʻana i ka wela hoʻoheheʻe mua

ʻO ka hoʻomalu wela gradient kahi hana o ka mea hana PCR e hoʻomaʻamaʻa i ka hoʻomaʻamaʻa ʻana i ka annealing primer ma PCR.ʻO ke kumu o ka hoʻonohonoho gradient ʻo ia ka hoʻokō ʻana i nā mahana like ʻole ma waena o nā modula, a ma o ≥2 ° C ka piʻi ʻana o ka mahana a hāʻule i waena o kēlā me kēia kolamu, hiki ke hoʻāʻo ʻia nā ʻokoʻa like ʻole i ka manawa like e loaʻa ai ka mahana annealing primer maikaʻi loa.ʻO ka manaʻo, loaʻa kahi gradient maoli i ka wela laina ma waena o nā modules.

Eia nō naʻe, hoʻohana maʻamau nā mea hoʻokele wela gradient maʻamau i hoʻokahi poloka wela a hoʻomalu i ka mahana ma o ʻelua mau mea hoʻomehana a me nā mea hoʻoluʻu i loaʻa ma nā ʻaoʻao ʻelua, e hopena pinepine i kēia mau palena:

ʻElua wale nō wela e hiki ke hoʻonoho ʻia: ʻo nā wela kiʻekiʻe a me nā wela haʻahaʻa no ka hoʻopili mua ʻana ua hoʻonohonoho ʻia ma nā ʻaoʻao ʻelua o ka module thermal, a ʻaʻole hiki ke hoʻokō ʻia ka hoʻonohonoho pololei ʻana o nā mahana ʻē aʻe ma waena o ka modul.

Ma muli o ka hoʻololi ʻana o ka wela ma waena o nā kolamu like ʻole, ʻoi aku ka maikaʻi o ka wela ma waena o nā ʻāpana ʻokoʻa ma ka module e hahai i kahi pihi sigmoidal ma mua o ka gradient linear maoli.

Laʻana wela

He mea koʻikoʻi ka hiki o ka mea hoʻokele wela ke hoʻomalu i ka wela hāpana no ka pololei o nā hopena PCR.He mea koʻikoʻi nā ʻāpana kikoʻī e like me ka ramp rate, ka manawa paʻa, a me nā algorithms no ka wānana ʻana i ka wela laʻana.

ʻO ka wikiwiki o ka hoʻomehana a me ka hoʻoluʻu o ka mīkini PCR ʻo ia ka hoʻololi ʻana o ka mahana ma waena o nā ʻanuʻu PCR e hiki mai ana i kekahi manawa.No ka mea, he manawa lō'ihi no ka ho'ololi 'ana o ka wela mai ka module a i ka la'ana, e lohi ana ka wela a me ka ho'olu'u maoli o ka hāpana.No laila, pono e wehewehe a hoʻomaopopo ʻia ka wehewehe ʻana o ka wikiwiki hoʻololi wela.

ʻO ka nui a i ʻole ke kiʻekiʻe o ka module ramp rate e hōʻike ana i ka wikiwiki o ka hoʻololi ʻana i ka wela i hiki i ka module ke hoʻokō i kahi manawa liʻiliʻi loa i ka wā o ka ramp.

Hōʻike ka awelika o ka hoʻololi ʻana o ka mahana i ka manawa lōʻihi a hāʻawi i kahi ana ʻoi aku ka nui o ka wikiwiki o ka mīkini PCR.

ʻO ka nui o ka hāpana hoʻomehana a me ka hoʻoluʻu ʻana a me ka awelika hāpana hoʻomehana a me ka hoʻoluʻu ʻana e hōʻike i ka mahana maoli i loaʻa i ka hāpana.ʻO ka helu o ka laʻana mehana a me ka hoʻoluʻu e hāʻawi i kahi hoʻohālikelike pololei o ka hana o ka mīkini PCR a me kona hopena i nā hopena PCR.

I ka hana ʻana i kahi hoʻololi kaʻa, ʻōlelo ʻia e hoʻohana i kahi mea kani me kahi papahana ramp rate e hoʻohālikelike i ke ʻano mua no ka maʻalahi o ka hoʻololi ʻana a me ka liʻiliʻi o ka hopena i ka PCR repeatability.

Pono e hoʻolālā ʻia ka mea holo kaʻa wela i nā ʻanuʻu manawa ma hope o ka hiki ʻana o ka hāpana i ka mahana i hoʻonohonoho ʻia.Ma kēiaʻano, e mālama ponoʻia ka manawa e mālamaʻia ai ka hāpana ma ka mahana i hoʻonohonohoʻia me nā kūlana pōʻai kūpono e pono ai i ka hana hana.

Hoʻohana pinepine ka poʻe kaʻa kaʻa wela i nā algorithm matematika paʻakikī e hōʻoia i hiki i nā laʻana ke hiki koke i kahi mahana i hoʻonohonoho ʻia e like me kahi papahana preset.Ma muli o ka nui o ka ʻōnaehana pane a me ka mānoanoa o nā plastik PCR i hoʻohana ʻia, hiki i ka algorithm ke wānana i ka mahana o ka hāpana a me ka manawa e hiki ai i ka mahana i hoʻonohonoho ʻia.Ke hilinaʻi nei i kēia mau algorithms, i ka wā o ka hoʻomehana ʻana a i ʻole ka hoʻoluʻu ʻana o ka thermal cycler, ʻoi aku ka maʻamau o ka wela o ka poloka i ka waiwai i hoʻonohonoho ʻia ma o ke kaʻina i kapa ʻia ʻo thermal block overshoot a undershoot paha.ʻO ia ʻano hoʻonohonoho e hōʻoia i ka hiki ʻana o ka hāpana i ka wela i hoʻonohonoho ʻia me ka hikiwawe me ka ʻole o ka overshooting a i ʻole undershooting iā ia iho.

Ka hoʻokō hoʻokolohua

ʻO nā mea e hiki ke hoʻonui i ka hana o kahi kaʻa kaʻa wela e pili ana i nā ramp rate, nā hoʻonohonoho poloka thermal, a me ka hoʻohui ʻana o nā paepae automation.

Hōʻike ka wikiwiki mehana a me ka hoʻoluʻu o ka mea hoʻokele wela i ka wikiwiki a hiki i ka mahana i hoʻonohonoho ʻia.ʻOi aku ka wikiwiki o ka piʻi ʻana a me ka hāʻule ʻana o ka mahana, ʻoi aku ka wikiwiki o ka holo ʻana o ka PCR, ʻo ia hoʻi, hiki ke hoʻopau ʻia nā hoʻokolohua hou aʻe i kahi manawa i hāʻawi ʻia.Eia kekahi, hiki ke hoʻonui ʻia nā hoʻokolohua me ka hoʻohana ʻana i nā polymerases DNA wikiwiki.

He mea koʻikoʻi nō hoʻi ka hoʻolālā ʻana o ka module thermal cycler no nā hoʻokolohua PCR.No ka laʻana, hiki i nā modula hiki ke hoʻololi i ka maʻalahi i ka helu o nā laʻana i kēlā me kēia holo.Eia kekahi, kūpono nā modula hoʻomehana me nā modula hiki ke hoʻopaʻa ʻia i kēlā me kēia mea no ka holo ʻana i nā polokalamu PCR like ʻole i ka manawa hoʻokahi ma kahi kaʻa kaʻa wela.

No ka PCR kiʻekiʻe kiʻekiʻe otometi, pono ka polokalamu e hoʻomalu i ka ʻōnaehana lawelawe pipetting e hoʻolālā a kūpono.He kūpono nā ʻōnaehana ʻakomi no ka hoʻokō ʻana i nā hopena PCR kiʻekiʻe no ka mea hiki ke holo mau me ka liʻiliʻi o ke kanaka, a laila e hōʻemi i ka manawa i koi ʻia no ka hoʻonohonoho hoʻokolohua manual a me ka hoʻonui ʻana i ka nui o nā hopena i ka manawa i hāʻawi ʻia.

ʻO ka hilinaʻi, ka lōʻihi a me ka hōʻoia ʻana i ka maikaʻi o nā Cyclers Thermal

Ma waho aʻe o ka hana a me ka hiki ke hana, pono i ka mīkini PCR ke kūpaʻa i ka hoʻohana pinepine ʻana, ke koʻikoʻi o ke kaiapuni, a me nā kūlana hoʻouna.Hiki i kekahi mau mea hana ke hōʻike i ke ʻano o ka hana ʻana o ka mea hana i ka hilinaʻi a me nā hoʻāʻo paʻa.ʻO ka ʻike mea hana PCR pili pū kekahi:

Pono: Hoʻohana ʻia nā rigs mīkini e hana i nā hoʻāʻo pinepine ʻana i nā ʻāpana mea kani i hoʻohana pinepine ʻia e like me nā poʻi wela, nā panela / touchscreens, a me nā modula uila uila.

Pumi ambient: Hiki ke hoʻohana ʻia nā keʻena kaiapuni e hoʻohālikelike i nā kūlana like ʻole o nā hoʻokolohua maʻamau, e like me ka mahana, ka haʻahaʻa.

ʻO ka hoʻāʻo ʻana: Hiki ke hoʻokō ʻia ka haʻalulu nui a me ka hoʻāʻo ʻana e like me nā kūlana International Safety Shipping Association e hōʻoia i ka hiki ʻana o ka mea kani i nā kūlana hana ʻole.

Palapala hōʻoia a me ka lawelawe no ka mālama ʻana i ka mīkini PCR

ʻOiai ʻo ka hilinaʻi paʻa a me ka hoʻāʻo ʻana i ka lōʻihi, loaʻa nā pilikia ʻenehana i ke ola o ka mea kani.No ka maluhia o ka noʻonoʻo, pono e noʻonoʻo ʻia ka palapala hōʻoia o ka mea hana, ka lawelawe, a me ka mālama ʻana i ke kūʻai ʻana i mea hana.

ʻO ka maʻalahi o nā lawelawe e like me ka mālama ʻana ma ka pūnaewele / hoʻi i ka hale hana, nā lawelawe nānā mamao, a me nā mea hana pani i ke kaʻina hana, a me nā mea ʻē aʻe, e hōʻemi i ka hopena o ka hana pono.

ʻO ka lōʻihi o ka manawa hoʻopaʻa, ka manawa huli o ka lawelawe, ka hiki ke loaʻa i ke kākoʻo ʻenehana, a me nā mākau o nā limahana kākoʻo ʻoihana.

Hiki i ka hoʻokomo ʻana i nā mea kani, ka hana, ka launa pū ʻana, a me ka hōʻoia ʻana e hoʻokō i nā koi hoʻoponopono a me nā koi pili.Loaʻa nā lawelawe mālama e like me ka hōʻoia ʻana i ka wela, ka hoʻāʻo ʻana, a me ka calibration e hōʻoia i ka hana pono o ka mea hana me nā ʻāpana pili.

Nā huahana pili: