Manaʻo kōkua no ka hoʻomaikaʻi ʻana i ka hoʻihoʻi hou ʻana o ke kāpili

1. Hoʻonui i ka hāpana hāpana i ka wā electrophoresis.

2. E hoʻohana hou i hoʻomākaukau electrophoresis buffer.

3. I ka wā e ʻoki ai i ke kāpili, e hoʻāʻo e ʻoki wale i ke kāpili me nā paʻi e hoʻemi i ka nui o ka ʻoki ʻana i ke kāpili: ʻaʻole pono ke kāpili me ka liʻiliʻi o nā ʻāpana kumu, i ʻole e hoʻopilikia i ka helu hoʻihoʻi.

4. Ma hope o ka hoʻoheheʻe ʻana i ʻelua mau ʻāpana kelu a ʻoi aku paha, e hoʻohana i ka paipu no ka nui o ka leo a hoʻololi iā ia i ke kolamu hoʻokahi.

5. ʻO ka hopena i hoʻohui ʻia i loko o ka sol hiki ke lilo i mea liʻiliʻi, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻopaʻa ʻana i ka DNA i ka membrane, akā ʻaʻole ma mua o 750ul.

6. ʻO ke kī i ka hoʻihoʻi ʻana i ka gel, ʻo ia ka hoʻopaʻa ʻana i ka DNA i ke kolamu ma o ka paʻakai paʻakai, acidity (charge) a me ka hydrophobicity o ka hopena i ke kolamu.No laila, inā kiʻekiʻe loa ka pH o ka pale electrophoresis, hiki ke hoʻohui ʻia ka 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) i ka sol;i mea e hoʻopili maikaʻi ai i nā molekala DNA ma ka membrane, hiki ke hoʻohui ʻia ka 30% isopropanol i ka wela i loko o ka wai ma hope o ka hoʻoheheʻe ʻana i ke kāpili.

7. Ma mua o ka hoʻohui ʻana i ka eluent, waiho i ke kolamu ma ka lumi wela no kekahi mau minuke (e pili ana i 10 mau minuke) e hoʻopau piha i ka ethanol.

8. ʻO ka hope, hoʻohui i ka liʻiliʻi liʻiliʻi e hōʻemi i ka leo hoʻihoʻi.ʻO ka mea maʻamau, hoʻohana ʻia ka 30-50μl eluent no ka elution (ʻaʻole liʻiliʻi, inā ʻaʻole hiki ke hoʻomaloʻo i ka membrane, ʻaʻole kūpono i ka elution);Aia nā kulu elution i waenakonu o ka membrane, e hoʻopau piha i ka DNA i hoʻopaʻa ʻia i ka membrane.

9. Ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka eluent, hiki ke hoʻoheheʻe ʻia i loko o ka ʻauʻau wai o 55 degere no 5 mau minuke a i ʻole e waiho ʻia i loko o ka wai ʻauʻau o 50 degere no ka ʻoi aku o 10 mau minuke, a i ʻole i hoʻopaʻa ʻia me ka parafilm ma 4 degere i ka pō, a laila centrifuged no ka hoʻihoʻi ʻana i ka lā aʻe, maikaʻi ka hopena.

10. E hoʻohui i ka ʻeluate i hoʻopaʻa ʻia i ke kolamu adsorption a me ka centrifuge hou.

Nā ala kikoʻī a me nā kaʻina hana no ka hoʻihoʻi ʻana i ka huahana PCR

1. ʻO ka hana hou ʻana i ka lāʻau maʻamau

Inā makemake ʻoe e hoʻihoʻi hou i ke kāpili, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻohana ʻana i kahi kit, kahi kūpono a ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hoʻihoʻi.Inā pono ʻoe e hoʻihoʻi me ka lima, hiki iā ʻoe ke hoʻohui i 3 mau manawa i ka nui o TE ma hope o ka ʻoki ʻana i ke kāpili.Ma hope o ka hoʻoheheʻe ʻana i loko o ka ʻauʻau wai, lawe ʻia ka phenol, phenol/chloroform me ka maʻemaʻe, a hoʻoheheʻe ʻia ka ethanol.ʻo ia wale nō.

2. Hoʻihoʻi hou ʻana i ka DNA mai nā gel melting point haʻahaʻa

Hoʻomaʻemaʻe i nā ʻāpana DNA E hoʻohui i ka TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) e like me ka nui o ka gel, a waiho i loko o kahi ʻauʻau wai 65 ° C no 5 mau minuke e hoʻopau loa i ka gel.

Ma hope o ka lawe ʻia ʻana i ka lumi wela, ua hoʻohui ʻia ka nui like o ka phenol (saturated me TE, TE i hoʻopaʻa ʻia i ka papa luna, a ua wehe ʻia ka papa haʻahaʻa o ka phenol) a hui ʻia ka hui ʻana (ʻaʻohe pono e hui ʻia), a centrifuged ma 12,000 rpm no 3 mau minuke.E hana hou i 1-2 manawa.

E lawe i ka supernatant, e hoʻohui i ka leo 0.1 o 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) a me 2.5 mau manawa o ka ethanol piha no ka hoʻokō ʻana i ka ua ethanol.E hoʻopau i ka DNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia me ka nui kūpono o TE, e ana i ka ʻike, a hoʻomākaukau no ka hoʻohana ʻana (hiki ke hoʻohana ʻia no ka nānā ʻana i ka hoʻokumu ʻana o nā ʻano gene, ka hoʻomākaukau ʻana, a me nā mea ʻē aʻe).

3. Hoʻihoʻi PCR me ka kikoʻī hoʻonui maikaʻi

Inā maikaʻi ka kikoʻī o ka PCR amplification, he hoʻomaʻemaʻe maʻalahi a hoʻihoʻi hou i ka huahana PCR.Hiki iā ʻoe ke hoʻohui i ka 50ug/ml proteinase K i ka huahana PCR, 37 degere no 1h, e unuhi i hoʻokahi manawa me ka phenol/chloroform, e unuhi i hoʻokahi me ka chloroform, a hoʻohui i ka 0.1 volume o ka supernatant.Ua loaʻa ka sodium acetate e ka ua me 2.5 mau puke o ka ethanol piha.

Nā huahana pili:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/