He aha ka lāʻau lapaʻau mRNA
Hoʻololi ka lāʻau lapaʻau mRNA i ka RNA i nā keʻena o ke kino e hōʻike a hana i nā antigens protein ma hope o nā hoʻololi kūpono i loko o ka vitro, a laila alakaʻi i ke kino e hana i kahi pane kūlohelohe e kūʻē i ka antigen, a laila e hoʻonui ai i ka hiki o ke kino.[1,3].
Kiʻi 1: Hōʻike kiʻi kiʻi o ka hopena o ka hoʻopili pololei ʻana o ka lāʻau lapaʻau mRNA [2]
Ka hoʻokaʻawale ʻana o nā lāʻau lapaʻau mRNA
Ua māhele ʻia nā lāʻau lapaʻau mRNA i ʻelua ʻano:hoʻopili ʻolemRNA a mehoʻonui iā ia ihomRNA: ʻaʻole hoʻopili wale ka mRNA i ka antigen target, akā hoʻopili pū i ka replication e hiki ai i ka intracellular RNA amplification a me ka mīkini hōʻike protein.Hoʻopili wale ʻia nā lāʻau lapaʻau mRNA i hoʻopili ʻole ʻia a loaʻa iā 5'a me 3''āpana i unuhi ʻole ʻia (UTR).Hāʻawi lākou i ka hoʻoulu piha ʻana o ka adaptability a me ka innate immunity, ʻo ia hoʻi ka hōʻike antigen in situ a me ka hoʻouna ʻana i nā hōʻailona pōʻino, a loaʻa iā ia nā noi aʻe.[2,3]
●Hiki ke hāʻawi i ka hoʻoulu piha ʻana o ka hiki ke hoʻololi ʻia a me ka palekana kūlohelohe, ʻo ia hoʻi ka hōʻike antigen in situ a me ka hoʻouna ʻana i nā hōʻailona pōʻino.
● Hiki iā ia ke hoʻoulu i ka pane ʻana o ka immune "kūpono", me nā mea hoʻohenehene a me nā mea hoʻohana kelepona a me ka hoʻomanaʻo pale
●Hiki ke hoʻohui i nā antigens ʻokoʻa me ka hoʻonui ʻole ʻana i ka paʻakikī o ka hoʻokumu ʻana i ke kano
● Hiki ke hoʻokō ʻia ka hoʻomaikaʻi mau ʻana o ka hiki ke hoʻopaʻa ʻia ma o ka hoʻomaʻamaʻa pinepine ʻana, a ʻaʻohe pane a liʻiliʻi paha i ka mea lawe.
●Heat stable mRNA vaccines hiki ke maʻalahi i ka lawe ʻana a me ka mālama ʻana i nā lāʻau lapaʻau
Kiʻi 2: Hōʻike kiʻi kiʻi o ka lāʻau lapaʻau mRNA a me kāna hana hōʻike antigen [4]
Nā hiʻohiʻona o nā lāʻau lapaʻau mRNA
Ke hoʻohālikelike ʻia me nā lāʻau lapaʻau kuʻuna, loaʻa nā kaʻina hana maʻalahi o ka mRNA, nā wikiwiki hoʻomohala wikiwiki, ʻaʻohe pono o ka moʻomeheu cell, a me nā kumu kūʻai haʻahaʻa.Ke hoʻohālikelike ʻia me nā maʻi DNA, ʻaʻole pono nā maʻi mRNA e komo i ka nucleus a ʻaʻohe pilikia o ka hoʻohui ʻana i ka genome host.Hiki ke hoʻololi i ka hapalua o ke ola ma ka hoʻololi.
Papa 1: Nā pono a me nā pōʻino o nā lāʻau lapaʻau mRNA
|
| Pōmaikaʻi | Ka hemahema |
| kano mRNA | ʻO ka noiʻi wikiwiki a me ka hoʻomohala ʻana, ʻo ka hana ʻana i ke kano he 40 lā wale nō | E hoʻoulu i kahi pane immune pono ʻole
|
| mRNA instability ma lalo o nā kūlana physiological, maʻalahi e hoʻohaʻahaʻa | ʻAʻole e hoʻohui i loko o ka genome e pale i nā hoʻololi therapeutic hiki
| |
| ʻAʻohe pono no kekahi hōʻailona localization nuklea, transcription | E hōʻoia ʻia ka pono o ka nuklea palekana
|
Kiʻi 3: Ka pakuhi o ka hana ʻana a me ka hoʻomākaukau ʻana o ka lāʻau lapaʻau mRNA [4]
Foregene Viral RNA Isolation kit
RT-qPCR maʻalahi (Hoʻokahi ʻanuʻu)
ʻO nā hoʻolālā i hoʻomaikaʻi ʻia no ka hoʻomākaukau ʻana i nā kano mRNA
Ma muli o ka maikaʻi ʻole o ka mRNA ponoʻī, maʻalahi ka hoʻohaʻahaʻa ʻana e nā nucleases i loko o nā ʻiʻo, ka haʻahaʻa haʻahaʻa o ke komo ʻana o ke kelepona, a me ka haʻahaʻa haʻahaʻa o ka unuhi ʻana, ua kaupalena kēia mau hemahema i ka hoʻohana ʻana i nā lāʻau lapaʻau mRNA.He kuleana koʻikoʻi loa ka maikaʻi o ka unuhi ʻana.Hiki ke hoʻokaʻawale ʻia nā kaʻa hoʻouna i nā vectors viral a me nā vectors non-viral (me nā liposomes, non-liposomes, viruses, nanoparticles, etc.).No laila, pono nā hana hoʻomaikaʻi kūpono.ʻO kēia ka hoʻolālā hoʻomaikaʻi pharmacological no ka hoʻomākaukau mRNA[2]
1 Hoʻopili i nā mea hoʻohālikelike pāpale a hoʻohana paha i nā enzyme capping e hoʻopaʻa i ka mRNA a hoʻonui i ka unuhi protein ma o ka hoʻopaʻa ʻana i ka eukaryotic translation initiation factor 4E (EIF4E)
2 Hoʻoponopono i nā mea i loko o ka 5′-untranslated region (UTR) a me 3′-UTR e hoʻopaʻa i ka mRNA a hoʻonui i ka unuhi protein.
3 Hiki i ka hoʻohui ʻana i ka huelo Poly(A) ke hoʻopaʻa i ka mRNA a hoʻonui i ka unuhi protein
4 Nā nucleosides i hoʻololi ʻia e hōʻemi i ka hoʻoulu ʻana i ka immune a hoʻonui i ka unuhi
5 ʻO ka hoʻomaʻemaʻe ʻana me RNase III a me ka hoʻomaʻemaʻe wai wikiwiki (FPLC) hiki ke hōʻemi i ka hoʻōla ʻana a hoʻonui i ka unuhi.
6 E hoʻoikaika i nā kaʻina a i ʻole nā codon e hoʻonui i ka unuhi
7 Hāʻawi pū i nā kumu hoʻomaka unuhi a me nā ʻano hana ʻē aʻe e hoʻololi i ka unuhi a me ka immunogenicity
Kiʻi 4: In vitro transcription (IVT) mRNA hana a me ke kaʻina hana hui [5]
Hoʻomākaukau nui o ka plasmid DNA
ʻO ka hoʻomaʻemaʻe DNA Plasmid ka mea e hoʻoneʻe nui i nā mea haumia e like me RNA, open-circle DNA endotoxin, host protein a host nucleic acid, a hoʻololi pinepine i ka plasmid recombinant i E. coli.E. coli undergoes high-density fermentation, a laila paʻa-wai hoʻokaʻawale, a me ka hōʻiliʻili o E. coli.Hoʻokomo ʻia ka E. coli i ka alkaline lysis, centrifugal solid-liquid separation a me ka microfiltration clarification ma hope o ka lysis, ultrafiltration a me ka noʻonoʻo ma hope o ka wehewehe ʻana, a laila hoʻomaʻemaʻe chromatographic.
Hoʻomaʻemaʻe i ka plasmid DNA:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, a me al.nā lāʻau lapaʻau mRNA - he wā hou i ka vaccinology [J].Nā Manaʻo Kūlohelohe ʻIke Laʻau Laʻau, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduction to RNA Vaccines.Ma: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Nā Hana ma ka Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G , Zhang C , Li J , et al.ʻO ka mRNA ma ke ʻano he ʻenehana hoʻololi no ka hoʻomohala ʻana i ka maʻi maʻi e hoʻopaʻa i nā maʻi maʻi maʻi [J].Hoʻoponopono Molekule, 2019.
【5】ʻO Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, , Hoʻopili ʻana i ka maʻi mRNA e kaulike i ka pane ʻana o ka maʻi kūlohelohe / Adaptive Immune, Nā ʻano i ka lāʻau lapaʻau Molecular, Volume 26, Helu 3,2020, ʻaoʻao 311-323.
Ka manawa hoʻouna: ʻAukake-05-2021
