He huaʻōlelo koʻikoʻi ʻo RNase i makemake ʻole nā ​​haumāna he nui e hoʻokō i nā hoʻokolohua RNA extraction.Me nā mea kaua piha, ua hoʻohaʻahaʻa ʻia ka RNA i lawe ʻia me nā mea ʻawaʻawa loa phenol a me chloroform.ʻAʻole au i hoʻokuʻikahi!!!I kēia lā, e nānā kākou i ke kumu o ka Rnase kaulana.

ʻO Ribonuclease (RNase), a i ʻole RNase, he nuclease hiki ke hoʻokahe i ka RNA i loko o nā molekole liʻiliʻi.ʻO RNase, ma ke ʻano he pūmua mole liʻiliʻi, paʻa ʻole .ʻAʻole hiki ke hoʻopau loa i ka wela kiʻekiʻe a me ke kiʻekiʻe kiʻekiʻe o ka hoʻomaʻamaʻa ʻana i ka mahu.ʻO ka paʻa o RNase ka mea nui mai nā paʻa disulfide i ka hale.No ka laʻana, ʻo ka RNase maʻamau o ka bovine pancreas he 124 amino acids wale nō, akā he 4 mau paʻa disulfide.ʻO ka pilina Sulfur a me ka pilina disulfide e hāʻawi iā RNase me ke kūpaʻa wela maikaʻi loa.Eia kekahi, he liʻiliʻi ko rnase kaumaha molecular a hiki ke hoʻihoʻi koke i kona conformation kumu i nā manawa he nui.

Ma waho aʻe o ka paʻa loa,Loaʻa nā RNases i nā wahi āpau i ka hale hana .ʻO RNase kahi mīkini pale ola.No ke kelepona, make pinepine ka RNA exogenous.Ke hoʻohālikelike ʻia me ka DNA exogenous, ʻoi aku ka pilikia o ka RNA exogenous.Ua unuhi ʻia ʻo RNA me ka hauʻoli, no laila ua hoʻololi nā mea ola a pau i nā RNases e pale aku i ka hoʻouka ʻana o ka RNA exogenous.No laila, ʻo nā cell bacteria i hoʻoulu ʻia i loko o ka hale hana a ʻo ʻoe ka mea nāna i lawe i ka RNA e hoʻopuka i ka ʻala o RNase.He nui ka RNase i loko o ke kino o ke kanaka (kohu, waimaka, a me nā mea ʻē aʻe, no laila, mai uē ke hoʻohaʻahaʻa ʻia ka RNA.ʻO ka nui o kou uē ʻana, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hōʻino ʻana o ka RNA!!ʻAʻole kūpono ʻo Sister Daiyu no ka unuhi ʻana o RNA!

Eia kekahi, i loko o kou ʻili palupalu ka nui o RNase, a ʻo nā māka, nā pipettes, nā puka friji, a me nā lima puka i hoʻopā ʻia e ka ʻili, aia pū kekahi RNase.

Me ka nui o ka rambling, e nānā kākou pehea e hana ai me RNases.

ʻO ka mea mua a nā mea a pau e noʻonoʻo ai i ka wā e wehe ai i ka RNADEPC(diethyl pyrocarbonate).Hoʻopau ka DEPC i ka protein ma o ka hui pū ʻana me ke apo imidazole o ka histidine pūʻulu hana RNase, a laila e kāohi ai i ka hana o ka enzyme.Hiki i ka 0.1% DEPC ke loaʻa ka hopena hoʻoneʻe maikaʻi ma Rnase, akā pono mākou e hoʻolohe i ka DEPC he carcinogen ʻike ʻia, no laila pono e uku ʻia ka nānā kūikawā i ka wā e hoʻohana ai.

No RNase, pono mākou e hoʻomaka mai nā ʻaoʻao ʻelua,ʻO ka mea mua ke kāohi i ka hana o ka RNase endogenous

Hiki i nā mea hoʻoheheʻe RNA maʻamau e like me guanidine isothiocyanate a me DTT i loko o Trizol ke wehe i ka paʻa disulfide o RNase, akā aia kekahi mau RNases, ʻoi aku ka nui o nā mea kikoo, no laila e hoʻolohe i ka wela haʻahaʻa.

1.E hoʻopaʻa koke i ka laʻana i loko o ka naikokene wai ma hope o ka lawe ʻana iā ia i waho, a i ʻole i loko o kahi hopena mālama mālama RNA kalepa.

2.Ma hope o ka unuhi ʻana i ka RNA o ka hāpana cell, hoʻohui i ka solution lysis a lyse ma ka pahu hau.

3. ʻOi aku ka maikaʻi o ka hoʻohana ʻana i ka nitrogen wai no ka wili ʻana ke hoʻohui ʻia nā ʻāpana kiko.I ka hoʻohana ʻana i ka homogenizer uila me ka ʻole o ka nitrogen wai, e hoʻolohe pono i ka hoʻomaʻamaʻa mua ʻana i ka adapter homogenate.

ʻO ka lua ka exogenous DNase

1.E hoʻopaʻa i nā mea kaua, e ʻaʻahu i ka lole keʻena hana, e hoʻokomo i ka pale maka, a e hoʻopaʻa pono i ke komo ʻana i nā mīkina lima hou (ʻaʻole e hoʻomākea loa!! Pono e hoʻomaopopo ʻia ʻo Trizol he mea ʻino loa, a he ikaika loa hoʻi ma o nā mīkina lima, no laila, mai kulu i kou mau lima).

2.ʻO nā ʻōlelo aʻoaʻo pipette i hoʻohana ʻia, nā paipu EP, nā paipu PCR a me nā mea hana ʻē aʻe e pono e de-RNase mālama ʻia.Hiki ke hoʻonāʻia i ka 0.1% DEPC a laila kaomi ma lalo o ke kaomi kiʻekiʻe.E noʻonoʻo i ka hana i loko o kahi pahu hau.Hiki i nā mea ʻino kūloko ke kūʻai pololei i nā mea hoʻopau no ka wehe ʻana i nā enzymes.

PS: E haʻi wau iā ʻoe i kahi ʻano palaualelo.ʻOiai ʻaʻole hiki i ka wela kiʻekiʻe a me ke kaomi kiʻekiʻe ke hoʻopau loa iā RNase, e hoʻoneʻe ia i kahi hapa nui.ʻO 2 mau manawa o ka wela kiʻekiʻe a me ke kiʻekiʻe kiʻekiʻe he hopena maikaʻi, a he liʻiliʻi ka hopena o ka unuhi ʻana o RNA.

3.Hiki i ka waiʻona ke hoʻopau i nā protein,no laila hiki ke holoi ʻia ka papa ʻaina RNA me ka waiʻona 75%. , a hiki no hoi ke pulupulu me ka waiona.

4.ʻO ka hopena hoʻoheheʻe RNA hope a me ka pahu centrifuge pono e mālama ʻia de-RNase.ʻO ka wai DEPC kahi hopena hoʻoheheʻe RNA maʻamau.E kamaʻilio e pili ana i ke ʻano hoʻomākaukau kūpono o ka wai DEPC (e hoʻomanaʻo e hoʻihoʻi hou i ka DEPC kalepa ke kūʻai ʻoe)

E hoʻohui i ka DEPC i ka wai ultrapure ma 1:1000, lulu maikaʻi, e kū i ka pō ma 37 ° C, a sterilize ma 121 ° C ma lalo o ka wela kiʻekiʻe a me ke kaomi kiʻekiʻe no 15 mau minuke.Hiki ke mālama ʻia ka wai DEPC ma -20°C ma 1ml aliquots.

ʻO ka hope, e hōʻuluʻulu: ʻo ka haʻahaʻa haʻahaʻa ke kī, mālama maikaʻi ʻia nā mea hoʻohana, paʻa i nā mea kaua a emi ʻole ke kamaʻilio!

ʻAe, ʻo ia ka hoʻolālā o kēia lā.Makemake wau iā ʻoe i ka ʻike a me ka maʻemaʻe RNA āu i ʻōlelo ai.ʻO ka A260/A280 ka 2.0!!!

ʻOiaʻiʻo, inā hoʻohana ʻoe i kahihana wela lumi RNA pahu pahu, ʻaʻole paha ʻoe e hālāwai me nā pilikia ma luna.

ʻO ka hana ma ka lumi wela, me ka hoʻohui ʻole ʻana i ka DNase, e unuhi i ka RNA a pau mai nā cell i 11 mau minuke, a e unuhi i ka RNA āpau mai nā ʻiʻo holoholona a i ʻole nā ​​​​mea kanu i 30 mau minuke.

No nā laʻana hoʻāʻo, e ʻoluʻolu e kelepona iā:overseas@foregene.com

Nā huahana pili:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/