Holoholona Huina RNA Isolation Kit Huina RNA Unuhi a me ka ho'oma'ema'e kime no na kino holoholona a me ka cell
ʻO ka wehewehe ʻana o ka pahu:
Hoʻopau wikiwiki a maikaʻi hoʻi i ka RNA holoʻokoʻa kiʻekiʻe-maʻemaʻe a kiʻekiʻe mai nā ʻiʻo holoholona like ʻole.
ʻAʻole pono e hopohopo e pili ana i ka degradation RNA.ʻO ka ʻōnaehana holoʻokoʻa he RNase-Free
Hoʻopau maikaʻi i ka DNA me ka hoʻohana ʻana i ke kolamu hoʻomaʻemaʻe DNA
Wehe i ka DNA me ka hoʻohui ʻole i ka DNase
Maʻalahi—ua pau nā hana a pau i ka wela lumi
Hiki ke hoʻopau i ka hana i loko o 30 mau minuke
Palekana—ʻaʻole hoʻohana ʻia ka mea hoʻoheheʻe organik
Maʻemaʻe kiʻekiʻe—OD260/280≈1.8-2.1
Nā wehewehe kits
50 Mākaukau, 200 Mākaukau
Hoʻohana kēia pahu i kakolamu milo a me ka formulahoʻomohala ʻia e kā mākou hui, hiki iā ia ke unuhi i ka RNA holoʻokoʻa kiʻekiʻe-maʻemaʻe a kiʻekiʻe loa mai nā ʻano holoholona like ʻole me ka hana kiʻekiʻe. Hāʻawi ʻo ia i kahi DNA-Cleaning Column, hiki ke hoʻokaʻawale a hoʻopili i ka DNA genomic mai ka supernatant a me ka lysate kiko, maʻalahi a mālama manawa;Hiki i ke kolamu RNA-wale ke hoʻopaʻa maikaʻi i ka RNA a hiki ke hana ʻia i ka manawa like me kahi ʻano ʻokoʻa He nui nā laʻana.
ʻO ka pūnaewele holoʻokoʻa he RNase-Free, iʻole e hoʻohaʻahaʻaʻia ka RNA i unuhiʻia;Buffer RW1, Buffer RW2 ʻōnaehana holoi holoi, no laila ʻo ka RNA i loaʻa ʻole i ka protein, DNA, ion, a me ka pollution hui.
Nā ʻāpana pahu
| Huina Hoʻokaʻawale RNA Holoholona | ||
| Nā ʻāpana pahu | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Hoʻopaʻa RL1* | 25ml | 100ml |
| Hoʻopaʻa RL2 | 15ml | 60ml |
| Hoʻopaʻa RW1* | 25ml | 100ml |
| Hoʻopaʻa RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Free ddH2O | 10ml | 40ml |
| Kolu RNA wale nō | 50 | 200 |
| Kona Hoomaemae DNA | 50 | 200 |
| Papa kuhikuhi | 1 apana | 1 apana |
ʻIke huahana
| Hōʻano | kolamu milo | Mea hoʻomaʻemaʻe | kolamu foregene, reagent |
| ʻO ka lele | 1-24 mau laʻana | Ka manawa no ka prep | ~30 min (24 mau laʻana) |
| Centrifuge | Pakaukau centrifuge | Pyrolysis kaʻawale | Hoʻokaʻawale Centrifugal |
| Laʻana | ʻiʻo holoholona;pūʻali koa | Ka nui o nā laʻana | Kikokikona: 10-20 mg;Kelepona:(1-5)×106 |
| Ka nui elution | 50-200 μL | Nui hoʻouka ʻana | 850 μL |
Nā hiʻohiʻona & pono
■ ʻAʻole pono e hopohopo no ka hoʻohaʻahaʻa ʻana o RNA;ʻo RNase-Free ka ʻōnaehana holoʻokoʻa
■ Hoʻopau maikaʻi i ka DNA-hoʻohana i ka DNA-Cleaning Column
■ Wehe i ka DNA me ka hookomo ole i ka DNase
■ Maalahi-ua pau na hana a pau ma ka wela lumi
■ Hiki ke hoʻopau i ka hana wikiwiki i 30 mau minuke
■ Palekana-ʻaʻole pono ka mea hoʻoheheʻe organik
■ Maʻemaʻe kiʻekiʻe -OD260/280≈1.8-2.1
Ke noi pahu
He kūpono ia no ka unuhi ʻana a me ka hoʻomaʻemaʻe ʻana i ka RNA holoʻokoʻa mai nā ʻano ʻiʻo holoholona hou a hauʻoli paha a i ʻole nā pūnaewele moʻomeheu.
Nā palena huahana
■ Nā noi i lalo: ka hoʻohui ʻana o ka cDNA mua, RT-PCR, molecular cloning, Northern Blot, etc.
■ Nā laʻana: nā ʻiʻo holoholona, nā pūnaewele moʻomeheu
■ Ka Papa Hana: Tissues 10-20mg, Cells(2-5)×106
■ Ka hiki ke hoʻopaʻa DNA kiʻekiʻe o ke kolamu hoʻomaʻemaʻe: 80 μg
■ Ka nui elution: 50-200 μl
Diagram
ʻO ka Animal Total RNA Isolation Kit i mālama ʻia he 20mg
Nā laʻana ʻiole hou, e lawe i ka 5% i hoʻomaʻemaʻe ʻia ka RNA 1% agar
ʻO ka electrophoresis glycogel
1: Spleen 2: Kidney
3: Ake 4: Puuwai
Ka mālama ʻana a me ka mālama ʻana
Hiki ke mālama ʻia ka pahu no 24 mau mahina ma ka lumi wela (15–25 ℃) a i ʻole 2–8 ℃ no ka manawa lōʻihi.Hiki ke mālama ʻia ka Buffer RL1 ma 4 ℃ no 1 mahina ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka β-mercapptoethanol (ke koho).
Nā ʻatikala i haʻi ʻia
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA-Loaded Lipid-like Nanoparticles no ka hoʻoponopono ʻana i ke ʻano o ke akepaʻa ma o ka hoʻolālā ʻana o ka Central Composite Design.ʻO Adv.Hana.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.ʻO ka apoptosis maʻamau o nā pūnaewele i loko o ka hoʻomākaukau ʻana i ka cell stem therapeutic e hana i nā hopena immunomodulatory ma o ka hoʻokuʻu ʻana o ka phosphatidylserine.Hōʻailona Transduct Target Ther.2021 Iulai 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Hoʻonui ka hoʻololi ʻana o N7-Methylguanosine tRNA i ka unuhi oncogenic mRNA a hāpai i ka holomua intrahepatic cholangiocarcinoma.Kelepona Mol.2021 Iulai 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, a me al.Hoʻololi ʻo Mettl14-Mediated m6A i ka hoʻoponopono hou ʻana i ka ate ma o ka mālama ʻana i ka Endoplasmic Reticulum Homeostasis.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Nā pahu hoʻokaʻawale RNA no nā kumu hoʻohālike ʻē aʻeloaʻa:
Cell, mea kanu, viral, koko, etc.
ʻAʻole lawe ʻia ka RNA a i ʻole nā hua RNA
Nui nā ʻano like ʻole e pili ana i ka pono o ka hoʻihoʻi hou ʻana, e like me: kiko kiko RNA maʻiʻo, ke ʻano o ka hana, ka nui elution, etc.
1. Hana ʻia ka ʻauʻau hau a i ʻole cryogenic (4 °C) centrifugation i ka wā o ka hana.
Manaʻo: E hana ma ka lumi wela (15-25 ° C) i ke kaʻina holoʻokoʻa, mai ʻauʻau hau a centrifuge i nā haʻahaʻa haʻahaʻa.
2. Ka mālama pono ʻole ʻana i ka laʻana a i ʻole ka nui o ka manawa e mālama ai i ka laʻana.
Manaʻo Manaʻo: E kūʻai i nā laʻana ma -80 °C a i ʻole i loko o ka hau hau i loko o ka wai hau a pale i ka hoʻohana pinepine ʻana i ka hau hau;e ho'āʻo e hoʻohana i ka ʻiʻo hou a i ʻole nā pūnaewele moʻomeheu no ka unuhi ʻana i ka RNA.
3. lawa ole la'ana lysis.
Manaʻo Manaʻo: I ka wā e hoʻohui ai i ka ʻiʻo, e hōʻoia i ka hoʻomaʻemaʻe ʻia ʻana o ka ʻiʻo a ua hoʻokaʻawale ʻia nā mea kikoo e wehewehe i ka hoʻokuʻu ʻana o RNA.
4. ʻAʻole i hoʻohui pono ʻia ka eluent.
Manaʻo: E hōʻoia i ka RNase-Free ddH2Hoʻohui ʻia ʻo O i kahi dropwise i ka waena o ka membrane kolamu hoʻomaʻemaʻe.
5. ʻAʻole i hoʻohui ʻia ka leo kūpono o ka ethanol piha i ka Buffer RL2 a i ʻole Buffer RW2.
Manaʻo Manaʻo: E hahai i nā kuhikuhi, e hoʻohui i ka leo kūpono o ka ethanol piha i ka Buffer RL2 a me Buffer RW2 a hui maikaʻi ma mua o ka hoʻohana ʻana i ka pahu.
6. ʻAʻole kūpono ke ʻano o ka laʻana.
Manaʻo: E hoʻohana i ka 10-20 mg o ka ʻiʻo a i ʻole (1-5) × 106nā pūnaewele no 500 μl buffer RL1, no ka mea, hiki i ka hoʻohana ʻana i ka ʻiʻo nui ke hopena i ka hōʻemi ʻana i ka RNA extraction.
7. Ka nui elution kūpono ʻole a i ʻole ka elution piha ʻole.
Manaʻo: ʻO ka nui elution o ke kolamu hoʻomaʻemaʻe ʻo 50-200 μl;inā ʻaʻole ʻoluʻolu ka hopena elution, pono ia e hoʻolōʻihi i ka manawa kau wela o ka lumi ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka RNase-Free ddH preheated.2ʻO, e laʻa no 5-10 min.
8. He koena ethanol ka kolamu hoʻomaʻemaʻe ma hope o ka holoi ʻana o Buffer RW2.
Manaʻo Manaʻo: Inā loaʻa ke koena ethanol ma hope o ka holoi ʻana o Buffer RW2, ʻo ka centrifugation paipu ʻole no 1min, hiki ke hoʻonui ʻia ka manawa no ka hana centrifugation pahu ʻole i 2min, a i ʻole ke kolamu hoʻomaʻemaʻe hiki ke kau ʻia ma ka lumi wela no 5 min e wehe pono i ke koena ethanol.
Hoʻohaʻahaʻa ʻia ka RNA hoʻomaʻemaʻe
ʻO ka maikaʻi o ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia e pili ana i nā mea e like me ka mālama ʻana i ka laʻana, RNase contamination, a me ka manipulation, etc.
1. ʻAʻole mālama ʻia nā ʻāpana kiko i ka manawa.
Manaʻo Manaʻo: Inā ʻaʻole hoʻohana ʻia nā laʻana a i ʻole nā pūnaewele i ka manawa kūpono ma hope o ka hōʻiliʻili ʻana, e mālama koke i ka cryopreserve ma -80 °C a i ʻole ka wai nitrogen.No ka unuhi ʻana i ka RNA, e hoʻohana i kahi ʻiʻo i lawe ʻia a i ʻole ka laʻana cell i ka wā hiki.
2. ʻO ka hoʻoheheʻe hou ʻia ʻana o nā laʻana kiko.
Manaʻo Manaʻo: I ka wā e mālama ai i nā laʻana ʻiʻo, ʻoi aku ka maikaʻi e ʻoki ʻia i mau ʻāpana liʻiliʻi no ka mālama ʻana, a e wehe i kekahi o nā ʻāpana i ka wā e hoʻohana ai ia mau mea e pale aku ai i ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana o ka hāpana a me ka hōʻino ʻana o RNA.
3. Hoʻokomo ʻia ʻo RNase a ʻaʻole hoʻohana i nā mīkina lima hoʻolele, masks, etc. i ka wā o ka hana.
Manaʻo Manaʻo: Hana maikaʻi ʻia nā hoʻokolohua RNA extraction ma nā keʻena hoʻoponopono RNA kaʻawale a holoi ʻia ka papaʻaina ma mua o ka hoʻokolohua.
E hoʻohana i nā mīkina lima a me nā maka i ka wā o ka hoʻokolohua e hōʻemi i ka hōʻemi ʻana o RNA ma muli o ka hoʻokomo ʻana o RNase.
4. Ho'ohaumia 'ia nā reagents me RNase i ka wā e ho'ohana ai.
Manaʻo Manaʻo: E hoʻololi me kahi Animal Total RNA Isolation Kit no nā hoʻokolohua pili.
5. ʻO nā paipu centrifuge, nā ʻōlelo aʻoaʻo, a me nā mea ʻē aʻe i hoʻohana ʻia i ka RNA manipulation ua haumia me RNase.
Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia i ka RNase-Free nā paipu centrifuge, nā ʻōlelo aʻoaʻo, nā pipette, a me nā mea ʻē aʻe i hoʻohana ʻia i ka unuhi RNA.
Hoʻopili ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia i nā hoʻokolohua ma lalo
Hoʻomaʻemaʻe ʻia ʻo RNA e ke kolamu hoʻomaʻemaʻe, inā ʻoi aku ka nui o nā ion paʻakai, ʻoi aku ka nui o ka protein ma lalo o ka hoʻokolohua, e like me: reverse transcription, Northern Blot et al.
1. He koena iona paakai ko ka RNA i hooleiia.
Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia ua hoʻohui ʻia ka nui kūpono o ka ethanol i ka Buffer RW2 a hana i 2 holoi kolamu hoʻomaʻemaʻe ma ka wikiwiki centrifugal i hōʻike ʻia no ka hana;inā loaʻa kekahi koena ion paʻakai, waiho i ke kolamu hoʻomaʻemaʻe iā Buffer RW2 no 5 min ma ka lumi wela a hana centrifugation e hoʻonui i ka wehe ʻana o ka paʻakai.
2. Ke koena ethanol i loko o ka RNA i hoʻoheheʻe ʻia.
Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia ma hope o ka holoi ʻana i ka RW2, e hoʻokō i ka hana centrifugation paipu ʻole ma ka wikiwiki centrifugation i hōʻike ʻia no ka hana, e hoʻonui i ka manawa o ka hana centrifugation paipu ʻole i 2 min inā he koena ethanol, a i ʻole waiho ʻia ma ka lumi wela no 5 min ma hope o ka centrifugation pahu hakahaka e hoʻonui i ka wehe ʻana o ke koena ethanol.
