PCR, lehulehu PCR, Ma kahi PCR, PCR huli, RT-PCR, qPCR（1）–PCR

E wehe mākou i nā manaʻo, nā ʻanuʻu a me nā kikoʻī o nā PCR like ʻole

Ⅰ. PCR

ʻO ka Polymerase Chain Reaction, i kapa ʻia ʻo PCR, he ʻenehana biological molecular i hoʻohana ʻia e hoʻonui i nā ʻāpana DNA kikoʻī.Hiki ke manaʻo ʻia he hoʻopiʻi DNA kūikawā in vitro.Ua ʻike ʻia ka DNA polymerase (DNA Polymerase I) i ka makahiki 1955, a ʻo Klenow Fragment o E. Coli, nona ka waiwai hoʻokolohua a me ka pono, ua ʻike ʻia e Dr. H. Klenow i ka hoʻomaka ʻana o nā makahiki 1970, akā no ka mea ʻaʻole ʻae kēia enzyme i ka mahana, hiki ke hoʻohaʻahaʻa i ka mahana wela, no laila ʻaʻole ia e hālāwai me ke kiʻekiʻe o ka polymerasegene chain reaction.ʻO nā enzymes i hoʻohana ʻia i kēia lā (i kapa ʻia ʻo Taq polymerase), ua hoʻokaʻawale ʻia mai Thermus aquaticus, kahi huakini puna wai wela i ka makahiki 1976. ʻO kona hiʻohiʻona hiki ke pale i ka wela kiʻekiʻe a he enzyme kūpono, akā hoʻohana nui ʻia ma hope o nā makahiki 1980.ʻO ka manaʻo kumu o ka prototype primitive mua o PCR ua like ia me ka hoʻoponopono ʻana a me ke kope ʻana, i manaʻo ʻia e Dr. KJell Kleppe i ka makahiki 1971. Ua hoʻopuka ʻo ia i ka kope mua maʻalahi a me ka wā pōkole (e like me nā hopena mua ʻelua o ka PCR).Ua hoʻomohala ʻia ka PCR i kēia lā e Dr. Kary B. Mullis ma 1983. Ua lawelawe ʻo Kauka Mullis i nā hui PE i kēlā makahiki, no laila he kūlana kūikawā ko PE ma ka ʻoihana PCR.Ua hoʻopuka ʻo Kauka Mullis i ka pepa pili mua me Saiki a me nā mea ʻē aʻe i ka makahiki 1985. Mai ia manawa, ʻo ka hoʻohana ʻana i ka PCR he mau kaukani mau mile i ka lā, a hiki ke ʻōlelo ʻia ka maikaʻi o nā pepa pili e hana i nā ʻano noiʻi he nui ʻole.Ma hope mai, hoʻohana nui ʻia ka ʻenehana PCR i ka noiʻi ʻepekema biological a me nā noi lapaʻau, e lilo i ʻenehana koʻikoʻi o ka noiʻi biology molecular.Ua lanakila ʻo Mullis i ka 1993 Nobel Prize in Chemistry.

PCRKumukānāwai

ʻO ke kumu kumu o ka ʻenehana PCR ua like ia me ke kaʻina hana hoʻopiʻi kūlohelohe o DNA, a ʻo kona kikoʻī e pili ana i ka oligonucleotide primer i hoʻohui ʻia i nā ʻaoʻao ʻelua o ke kaʻina pahuhopu.Hoʻokumu ʻia ka PCR me ka degeneration-annealing-extending ʻekolu mau ʻanuʻu hopena: ①Degeneration o ka DNA template: Ma hope o ka wela ʻana o ka DNA template ma kahi o 93°C no kekahi manawa, ʻo ka hoʻonā DNA pālua no ka DNA kaulahao ʻelua i hana ʻia e ka PCR amplification o ka DNA template Haʻalele ʻana, e hana ia i kaulahao hoʻokahi i hiki ke hoʻomākaukau ʻia no ka hopena aʻe.②Ka hoʻopili ʻana (hui) o ka DNA template a me ka mea mua: Ma hope o ka wela a hoʻohaʻahaʻa ʻia o ka DNA template i hoʻokahi kaulahao, hāʻule ka mahana ma kahi o 55°C.ʻO ke kaʻina hoʻohui o ka primer a me ka DNA template single-chain.③Ka hoʻolōʻihi ʻia o ka primer: DNA template-ʻo ka hoʻopaʻa ʻana i hoʻokumu ʻia ma ka hana a TaqDNA polymerase, me ka dNTP ma ke ʻano he ʻano maka.E mālama i ke kumu o ka hana hou ʻana, e hoʻohui i kahi kaulahao kope semi-reserved hou e hoʻokō i ke kaulahao DNA template, a e hana hou i ke kaʻina degeneration-annealing-extension ʻekolu mau kaʻina e hiki ke loaʻa hou aku ka "paʻa kope semi-reserved", a loaʻa hou kēia kaulahao hou E lilo i kumu hoʻohālike no ka pōʻaiapuni aʻe.He 2-4min e hoʻopau ai i ka loop, hiki ke hoʻonui ʻia ka gene target i mau miliona mau manawa i 2-3 mau hola.

KūlanaPCRPūnaehana Manaʻo

ʻElima mau mea o ka hopena PCR

He ʻelima mau ʻano mea i komo i ka hopena PCR, ʻo ia hoʻi ka primer, enzyme, dNTP, template and buffer (pono ʻia ka Mg2+).[Kaʻina hana PCR]

Ua māhele ʻia ke kaʻina hana PCR maʻamau i ʻekolu mau ʻanuʻu

1. Hoʻohaʻahaʻa DNA (90°C-96°C): Nā mamana DNA kaulahao pālua ma lalo o ka hana wela, haki nā paʻa hydrogen, e hana ana i DNA kaulahao hoʻokahi.

2. Annealing (25 ℃ -65 ℃): Hoʻemi ʻia ka mahana o ka ʻōnaehana, hoʻohui ʻia ka primer me ka template DNA e hana i kahi kaulahao lua kūloko.

3. Hoʻonui (70 ℃ -75 ℃): Ma lalo o ka hana a Taq enzyme (e pili ana i 72 ° C, ka hana maikaʻi loa), hoʻohana ʻia ka dNTP ma ke ʻano he mea maka, e hoʻolōʻihi ʻia mai ka 5 'hopena o ka primer → 3' hopena, synthesis a me ka template e hoʻokō i kēlā me kēia kaulahao DNA.

Hoʻopau ʻia kēlā me kēia pōʻai, hoʻopili ʻia a hoʻonui ʻia, e pālua i ka ʻike DNA.I kēia manawa, ma muli o ka pōkole amplification wahi, hiki ke hana hou ʻia kekahi PCR i ka manawa pōkole inā ʻaʻole maikaʻi ka hana enzyme Taq, no laila hiki ke hoʻololi ʻia i ʻelua mau ʻanuʻu, ʻo ia hoʻi, hiki ke hana ʻia ka annealing a me ka hoʻonui ʻana ma 60 ° C-65 ° C i ka manawa like.I mea e hōʻemi ai i ke kaʻina hana o ka hāpai ʻana a me ka hoʻomaha a hoʻomaikaʻi i ka wikiwiki pane.

Nā hiʻohiʻona PCR Reaction

● Kiʻekiʻe-Specificity

ʻO nā mea koʻikoʻi koʻikoʻi o ka pane PCR: ①Ka hui pū ʻana o ka primer a me ka DNA template.②Ke kumu o ka hoʻohui kumu.③Ke kūpaʻa o ka TaqDNA polymerase synthesis reaction.④ ʻO ka kikoʻī a me ka conservativeness o ka gene target.

ʻO ka hui kūpono o nā primers a me nā templates ke kī.Hoʻokumu ʻia ka hoʻopaʻa ʻana o ka primer a me ka template a me ka hoʻonui ʻana i ke kaulahao kumu ma ke kumu o ka hoʻohālikelike kumu alkaline.ʻO ke kūpaʻa o ka polymerase synthesis reactions a me ke kūpaʻa wela kiʻekiʻe o ka Taq DNA polymerase e hana i ka hoʻopaʻa ʻana (compound) o ka template a me ka primer i ka hopena hiki ke hana ʻia ma kahi wela kiʻekiʻe.Hoʻonui nuiʻia ka kiko'ī o ka hui.Hiki i ka clip ke mālama i kahi kiʻekiʻe o ka pololei.Ma ke koho ʻana i kahi ʻāpana genetic i loaʻa me ka conservative kiʻekiʻe a me ka conservative kiʻekiʻe, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o kona kikoʻī.

● Hoʻonaʻauao kiʻekiʻe

Hoʻonui ʻia ka nui hana o nā huahana PCR e ka index, hiki ke hoʻonui i ke kumu hoʻomaka o Picker (PG=10-12) e hoʻonui i ke kiʻekiʻe o ka microcontroller i ka pae o micrograms (μg= -6).Hiki ke ʻike ʻia kahi pūnaewele i ʻike ʻia mai 1 miliona mau kelepona;i ka ʻike ʻana i nā maʻi maʻi, hiki i ka sensitivity o PCR ke hiki i 3 RFUs (nā ʻāpana i hoʻokumu ʻia nā ʻāpana);ʻO ka helu haʻahaʻa loa i ka ʻepekema bacterial he 3 bacteria.

● Maʻalahi a wikiwiki

Hoʻohana ka noʻonoʻo PCR i kahi polymerase Taq DNA kiʻekiʻe, e hoʻohui i ka hopena hopena i ka manawa hoʻokahi, ʻo ia hoʻi, kahi hopena degeneration-anneal-extension ma luna o ka DNA amplification solution a me ka ipu ʻauʻau wai.ʻO ka maʻamau, hoʻopau ʻia ka hopena amplification ma 2 a 4 mau hola.Hoʻopili pinepine ʻia nā huahana hoʻonui ʻia e ka pahi kaua uila, ʻaʻole pono e hoʻohana i nā isotopes, ʻaʻohe pollution radioactive, a me ka hoʻolaha maʻalahi.

● He haʻahaʻa ka maʻemaʻe o ka specimen

ʻAʻole pono e hoʻokaʻawale i nā maʻi maʻi a i ʻole bacteria a me nā cell moʻomeheu.Hiki ke hoʻohana ʻia nā huahana crude DNA a me RNA i mea hoʻonui.Hiki ke hoʻohana pololei ʻia ka ʻike ʻana i ka hoʻonui ʻana o DNA me ka hoʻohana ʻana i nā specimens lapaʻau e like me ke koko, ka wai kino, ka wai holoi ʻū, ka lauoho, nā cell, a me nā mea ola.

PCRpilikia maʻamau

● Hoʻopunipuni hoʻopunipuni, ʻaʻohe mea i hoʻonui ʻia

ʻO nā pae koʻikoʻi o ka hopena PCR: ① ka hoʻomākaukau ʻana i nā waikawa nucleic template, ② ka maikaʻi a me ke kikoʻī o nā primers, ③ ka maikaʻi o nā enzymes ④ nā kūlana pōʻai PCR.Pono e nānā ʻia a hoʻopaʻa ʻia ke kumu no nā loulou i luna.

Māmā: ① Aia i loko o ka la'ana nā pūmua like'ole, ② Aia i loko o ka ma'i he Taq enzyme inhibitor, ③ 'A'ole i ho'opau 'ia ka pūmua i loko o ka ma'i, 'o ia ho'i ka pūmua hui i loko o ka chromosome.⑤ ʻAʻole maikaʻi ka hoʻohaʻahaʻa ʻana i ka waika nucleic Deminer.Ke maikaʻi ka maikaʻi o nā enzymes a me nā primers, ʻaʻohe band amplification, ʻo ia paha ka hoʻomaʻamaʻa digestive ʻana o nā specimens.Aia kekahi hewa i ke kaʻina hana nucleic acid extraction, no laila, no ka hoʻomākaukau ʻana i kahi hopena digestion kūpono a paʻa, pono e hoʻopaʻa ʻia kāna kaʻina hana a ʻaʻole hoʻololi wale ʻia.

Enzyme inactivation: pono e hoʻohana pū ʻia kahi enzyme hou a i ʻole nā ​​mea ʻelua kahiko a me nā enzyme hou e nānā i ka nalowale a i ʻole lawa ʻole ka hana o ka enzyme, e alakaʻi ana i nā hewa hewa.Pono e hoʻomaopopo ʻia ʻo Taq enzyme a i ʻole ethidium bromide i kekahi manawa poina.

Primer: ʻo ka maikaʻi o ke kumu mua, ka hoʻopaʻa ʻana o ka primer, a inā paha he symmetrical ka ʻike ʻana o nā kumu ʻelua.He kumu maʻamau ia no ka pau ʻole o ka PCR a i ʻole ka piʻi ʻana o ka hui ʻaʻole kūpono a hiki ke hoʻopuehu.Aia nā pilikia me ka maikaʻi o nā kumu mua o kekahi mau helu pūʻulu.Loaʻa nā kumu ʻelua i ka ʻike kiʻekiʻe a me ka haʻahaʻa haʻahaʻa, e hoʻonui ai i ka asymmetric amplification haʻahaʻa.ʻO nā mea hoʻohālikelike: ① E koho i kahi kumu mua maikaʻi no ka synthesize i nā ʻāpana.② ʻAʻole hilinaʻi wale ka ʻike o ka primer i ka waiwai OD, akā hoʻolohe pū i ka wai mua o ka primer e hana ai i ka agar sugar gel electrophoresis.Pono e loaʻa kahi ʻāpana kāʻei mua, a ʻo ka ʻōlinolino o nā kumu mua ʻelua e kūlike maʻamau.ʻO Belt, PCR hiki ke hāʻule i kēia manawa, a pono e hoʻoholo ʻia me ka hui mua synthesis.Inā kiʻekiʻe ke kumu mua, haʻahaʻa ka ʻōlinolino, a pono e kaulike kona ʻike ke hoʻoheheʻe ʻia.③ Pono e uku ʻia ka mea mua a mālama ʻia ma kahi ʻano kiʻekiʻe e pale ai i ka nui o ka hau a i ʻole ka lōʻihi o nā ʻāpana refrigeration o ka friji, kahi e hoʻopōʻino ai ka mea mua.④ ʻAʻole kūpono ka hoʻolālā ʻana o ka primer, e like me ka lawa ʻole o ka lōʻihi o ka primer, a ua hoʻokumu ʻia ka di cluster ma waena o nā primers.

Mg2+concentration: He hopena nui ko Mg2+ion i ka pono o ka hoʻonui ʻana i ka PCR.Hiki ke ho'ēmi i ka hoʻonui ʻana i ke kāne o ka PCR amplification.Inā haʻahaʻa loa ka manaʻo, hiki i ka PCR amplification output ke hana i ka PCR amplification hemahema me ka ʻole o ka pā hoʻonui.

Hoʻololi i ka nui o ka hopena: ʻO ka leo i hoʻohana ʻia i ka PCR amplification ʻo 20ul, 30ul, a me 50ul a i ʻole 100uL, ua hoʻonohonoho ʻia ka nui o ka noi no ka hoʻonui PCR e like me nā kumu like ʻole o ka noiʻi ʻepekema a me ka hoʻāʻo ʻana.Ma hope o ka hanaʻana i nā puke liʻiliʻi e like me 20ul, pono e hana i kahi kūlana kaula i ka hanaʻana i ka nui, iʻole e hāʻule.

Nā kumu kino: He mea nui ka hoʻololi ʻana no ka hoʻonui PCR.Inā haʻahaʻa ka mahana degeneration, pōkole ka manawa degeneration, hiki ke hana i nā mea hoʻopunipuni wahaheʻe;ʻO ka haʻahaʻa haʻahaʻa haʻahaʻa haʻahaʻa hiki ke hana i ka hoʻonui ʻole kikoʻī a hōʻemi i ka pono hoʻonui kikoʻī.Hoʻopilikia nui i ka hui pū ʻana o nā primers a me nā hoʻohālikelike e hōʻemi i ka pono o ka hoʻonui ʻana i ka PCR.I kekahi manawa pono e hoʻohana i nā thermometers maʻamau e ʻike i ka ʻokoʻa, annealing a me ka lōʻihi o ka mahana i ka hoʻonui a i ʻole ka wai-soluble cooker, ʻo ia kekahi o nā kumu no ka hemahema o ka PCR.

Nā ʻano ʻokoʻa o ke kaʻina pahuhopu: Inā loaʻa ke kaʻina pahuhopu, hoʻololi a holoi ʻia paha, hui pū ʻia ka hui ʻana o ka prototype a me ka template, a i ʻole ma muli o ka nele o kahi kaʻina i manaʻo ʻia, e nalowale ka primer a me ka template i ke kaʻina hoʻohui, a ʻaʻole holomua kāna PCR amplification.

● Hoʻopunipuni maikaʻi

ʻIke like ʻia ka puʻupuʻu PCR amplification me ka pūʻulu kaʻina i hoʻopaʻa ʻia, a i kekahi manawa ʻoi aku ka maʻemaʻe a ʻoi aku ka kiʻekiʻe o kāna pū.

ʻAʻole kūpono ka hoʻolālā mua: ʻo ke kaʻina hoʻonui i koho ʻia a me ke kaʻina hoʻonui non-purpose he homologous, no laila ke hoʻonui ʻia ka PCR, ʻo nā huahana PCR i hoʻonui ʻia he mau kaʻina hana ʻole.He pōkole loa ke kaʻina i manaʻo ʻia a he pōkole paha ke kumu mua, a ua maʻalahi ia i ka hoʻopunipuni.Pono e hoʻolālā hou.

ʻO ka hoʻohaumia keʻa o ke kaʻina pahuhopu a i ʻole nā ​​huahana hoʻonui: ʻElua kumu o kēia haumia: ʻO ka mua, hoʻohaumia keʻa o ka genome holoʻokoʻa a i ʻole nā ​​ʻāpana nui, e alakaʻi ana i nā hopena maikaʻi ʻole.Hiki ke hoʻoholo ʻia kēia ʻano hoʻopunipuni wahaheʻe e kēia mau ʻano: E akahele a akahai i ka wā e hana ai i mea e pale aku ai i ke kaʻina pahuhopu mai ka hoʻohu ʻia ʻana i loko o ka pū hāpana a i ʻole ka paʻi ʻana i waho o ka paipu centrifugal.Ma waho aʻe o nā enzymes a me nā mea ʻaʻole hiki ke kū i nā wela kiʻekiʻe, pono e hoʻomaʻemaʻe ʻia nā reagents a i ʻole nā ​​​​mea hana me ke kaomi kiʻekiʻe.Pono e hoʻohana ʻia nā paipu centrifugal a me nā laʻana i ka manawa hoʻokahi.I ka wā e pono ai, ma mua o ka hoʻohui ʻana i nā specimens, e hōʻike ʻia ka paipu hopena a me ka reagent i nā kukuna ultraviolet e hoʻopau i ka wai nucleic e noho nei.ʻO ka lua, nā ʻāpana liʻiliʻi i ka haumia ea.ʻOi aku ka pōkole o kēia mau ʻāpana liʻiliʻi ma mua o ke kaʻina i manaʻo ʻia, akā loaʻa iā lākou kekahi homology.Hiki ke hoʻopili ʻia kekahi i kekahi.Ma hope o ka hoʻokō ʻana i nā primers, hiki ke hoʻonui ʻia ka huahana PCR, kahi e hoʻopiʻi ai i ka hana maikaʻi ʻole.Hiki ke hoʻohana ʻia e hōʻemi a hoʻopau paha i ke ʻano PCR pūnana.

● Hōʻike i ka pūʻulu hoʻonui kikoʻī ʻole

ʻAʻole kūlike nā pūʻali i ʻike ʻia ma hope o ka hoʻonui ʻana i ka PCR me ka nui i manaʻo ʻia, a i ʻole ka nui a i ʻole ka liʻiliʻi, a i ka manawa like, a i ka manawa like, nā pūʻali hoʻonui kikoʻī a me nā pūʻulu hoʻonui ʻole.ʻO ka puka ʻana mai o nā pūnaʻi kikoʻī ʻole: ʻO ka mua, ʻaʻole i hoʻopiha piha nā kumu mua i ka kaʻina i manaʻo ʻia, a i ʻole ka polymerization o ka primer e hana i kahi hui di.ʻO ka lua, he kiʻekiʻe loa ka neʻe ʻana o nā MG2+ ion, haʻahaʻa loa ka mahana annealing, a pili ka helu o nā pōʻai PCR.ʻO ka lua, ka maikaʻi a me ka nui o nā enzymes.ʻO ka manawa pinepine, hiki i nā enzymes o kekahi mau kumu ke maʻalahi i nā hui kūikawā ʻole a ʻaʻole i loaʻa nā enzymes o kahi kumu ʻē aʻe.I kekahi manawa, hiki mai ka hoʻonui ʻole ʻana o nā enzyme.ʻO nā mea hoʻohālikelike: i hoʻolālā hou ʻia nā mea hoihoi inā pono.E hoʻemi i ka nui o ka enzyme a i ʻole e hoʻololi i ka enzyme o kahi kumu ʻē aʻe.E ho'ēmi i ka nui o nā mea mua, e hoʻonui i ka nui o nā mamana ma ke kūpono, a e hoʻemi i ka helu o nā pōʻai.E hoʻonui pono i ka mahana annealing a i ʻole e hoʻohana i ke ala wela ʻelua (93 ° C degeneration, annealing a hoʻonui ma kahi o 65 ° C).

● Hōʻike ʻia i ke kāwele palaka a i ʻole ka lipine smear

ʻIke ʻia ka hoʻonui ʻia ʻana o PCR i kekahi manawa e hoʻopili ʻia a i ʻole nā ​​​​kāʻei e like me ke kāpeti.No ke kumu, ma muli o ka nui o nā enzymes a i ʻole ka maikaʻi ʻole o ka enzyme, ua kiʻekiʻe ke kiʻekiʻe o ka dNTP, kiʻekiʻe ke kiʻekiʻe o ka Mg2+, haʻahaʻa loa ka mahana annealing, a ʻoi aku ka nui o nā pōʻai.ʻO nā mea e pale aku ai: ①E hoʻemi i ka nui o nā enzymes, a i ʻole e hoʻololi i ka enzyme o kahi kumu ʻē aʻe.②E ho'ēmi i ka manaʻo o ka dNTP ③E hoʻemi pono i ka Mg2+.④E hoʻonui i ka nui o nā mamana a hoʻemi i ka helu o nā pōʻai.

Nā Huahana Pili

PCR Heroᵀᴹ (Me ka Pelu)

◮ ʻOi aku ka hilinaʻi kiʻekiʻe: 6 manawa i ko Taq enzyme maʻamau;

◮ ʻOi aku ka wikiwiki o ka hoʻonui ʻana

◮ ʻOi aku ka hiki ke hoʻololi ʻia

◮ ʻOi aku ka maikaʻi o ka hoʻonui ʻana

◮ ʻOi aku ka ikaika o ka hoʻomanawanui ʻana o ke kaiapuni: kau ʻia ma 37°C no hoʻokahi pule, mālama ʻia ma mua o 90% hana;

◮ He 5'→3' DNA polymerase hana a me 5'→3' exonuclease hana, me ka 3'→5' exonuclease hana.

PCR Easyᵀᴹ (Me ka Pelu)

ʻO ka ʻōnaehana pane kū hoʻokahi a me ka Taq DNA Polymerase kiʻekiʻe e hana i ka hopena PCR i ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka amplification pono, kikoʻī a me ka naʻau.

RT-qPCR Easyᵀᴹ (Hoʻokahi Kaʻina)-SYBR Green I

◮ Hoʻokahi-step kit e hana i ka hoʻololi ʻana a me ka qPCR ʻelua mau hopena i loko o ka paipu hoʻokahi, pono wale nō e hoʻohui i ka RNA template, nā kumu PCR kikoʻī a me ka RNase-Free ddH₂O.

◮ Hiki i ka pahu ke hoʻokaʻawale i ka RNA viral a i ʻole ka huli ʻana i ka RNA.

◮ Hoʻohana ka kit i kahi Foregene reverse transcription reagent a me Foregene HotStar Taq DNA Polymerase i hui pū ʻia me kahi ʻōnaehana hoʻololi kūʻokoʻa e hoʻomaikaʻi maikaʻi i ka pono amplification a me ka kikoʻī o ka pane.

◮ ʻO ka ʻōnaehana hopena maikaʻi loa e loaʻa i ka hopena ka ʻike kiʻekiʻe o ka ʻike, ʻoi aku ka ikaika o ka wela, a me ka hoʻomanawanui.

◮ RT-qPCR maʻalahi^TM(Hoʻokahi KaʻAnuʻu) - SYBR Green I kit hele mai me ka ROX internal reference dye, hiki ke hoʻohana ʻia no ka hoʻopau ʻana i ka hōʻailona hōʻailona a me nā hewa hōʻailona ma waena o nā pūnāwai, kahi kūpono i nā mea kūʻai aku e hoʻohana i nā ʻano like ʻole o nā mea kani PCR quantitative.

RT maʻalahi^TMII (Master Premix no ka hoʻohui ʻana o ka cDNA kaula mua noPCR manawa maoli)

-Ka hiki ke hoʻopau i ka gDNA, hiki ke wehe i ka gDNA i ka template i loko o 2 mau minuke.

-Efficient reverse transcription system, he 15 minuke wale no e hoopau ai i ka synthesis o ka cDNA strand mua.

- Nā hiʻohiʻona paʻakikī: hiki ke hoʻohuli ʻia nā hiʻohiʻona me ka maʻiʻo GC kiʻekiʻe a me ka hoʻolālā lua paʻakikī me ka hana kiʻekiʻe.

-High-sensitivity reverse transcription system, pg-level templates hiki ke loaʻa i ka cDNA kiʻekiʻe.

-ʻO ka ʻōnaehana transcription reverse he paʻa wela kiʻekiʻe, ʻo ka mahana hopena maikaʻi loa ʻo 42 ℃, a loaʻa mau ka hana transcription hoʻohuli maikaʻi ma 50 ℃.