Hiki iā mākou ke kuleana e hoʻokō i kāu mau koi a lawelawe maikaʻi iā ʻoe.ʻO kou leʻaleʻa ko mākou uku nui loa.Ke ʻimi nei mākou i kāu nānā no ka hoʻonui hui ʻana no ke kumu kūʻai hale no Kina 64 Well Plate Magnetic Bead Nucleic Acid Extraction KitDNA Rna Hoomaemae Isolation Kitme CE Mark., E hoʻomaka nā mea kūʻai me!ʻO nā mea a pau āu e makemake ai, pono mākou e hana i kā mākou hiki ke kōkua iā ʻoe.Hoʻokipa maikaʻi mākou i nā manaʻo mai nā wahi a pau o ka honua holoʻokoʻa e hui pū me mākou no ka hoʻonui ʻana i kekahi.
Hiki iā mākou ke kuleana e hoʻokō i kāu mau koi a lawelawe maikaʻi iā ʻoe.ʻO kou leʻaleʻa ko mākou uku nui loa.Ua ʻimi mākou i mua no kāu hōʻoia no ka hoʻonui hui ʻana noKina Nucleic Acid Extraction Kit, DNA Rna Hoomaemae Isolation Kit, No ka ʻoi aku o ʻumi mau makahiki i ka ʻike ma kēia faila, ua loaʻa i kā mākou hui ka inoa kiʻekiʻe mai ka home a ma waho.No laila ke hoʻokipa nei mākou i nā hoaaloha mai nā wahi a pau e hele mai e hoʻopili iā mākou, ʻaʻole wale no ka ʻoihana, akā no ka pilina.

wehewehe

Ke hoʻohana nei kēia pahu i ke kolamu spin a me ke ʻano i hoʻomohala ʻia e Foregene, hiki iā ia ke hoʻokaʻawale maikaʻi i ka RNA piha maʻemaʻe kiʻekiʻe a kiʻekiʻe mai nā cell i hoʻoulu ʻia ma nā papa 96, 24, 12, a me 6-well.

Hāʻawi ka pahu i kahi kolamu hoʻomaʻemaʻe DNA maikaʻi, hiki ke hoʻokaʻawale i ka supernatant a me ka cell lysate, hoʻopaʻa a wehe i ka DNA genomic.He maʻalahi ka hana a mālama manawa.

Hiki i ke kolamu RNA-wale ke hoʻopaʻa maikaʻi i ka RNA me kahi ʻano kū hoʻokahi.Hiki ke hana ʻia ka nui o nā laʻana i ka manawa like.

Nā ʻāpana pahu

*E ʻoluʻolu e ʻaʻahu i nā mīkina lima a e hana i nā hana pale i ka wā o ka hana ʻana no ka mea aia ʻo Buffer cRL1 a me Buffer RW1 i nā paʻakai chaotropic hoʻonāukiuki.

Nā hiʻohiʻona & pono

■ Hoʻohana ʻia ke kaʻina holoʻokoʻa ma ka lumi wela (15-25 ℃), me ka ʻauʻau hau a me ka centrifugation haʻahaʻa.
■ ʻO ka pahu holoʻokoʻa he RNase-Free, ʻaʻohe pono e hopohopo e pili ana i ka hōʻino ʻana o RNA.
■ Hoʻopaʻa pono ʻia ke kolamu hoʻomaʻemaʻe DNA i ka DNA, i hiki i ka pahu ke hoʻopau i ka ʻino DNA genomic me ka hoʻohui ʻole ʻana i ka DNase hou.
■ Loaʻa RNA kiʻekiʻe: Hiki i ke kolamu RNA-wale a me ka hoʻohālikelike kū hoʻokahi ke hoʻomaʻemaʻe pono i ka RNA.
■ ʻO ka wikiwiki wikiwiki: maʻalahi ka hana a hiki ke hoʻopau i nā minuke 11.
■ Palekana: ʻAʻole koi ʻia ka mea hoʻoponopono organik.
■ Ke kūlana kiʻekiʻe: ʻO ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia he maʻemaʻe kiʻekiʻe, ʻaʻohe protein a me nā mea haumia ʻē aʻe, a hiki ke hālāwai me nā hoʻokolohua like ʻole.

Ke noi pahu

He kūpono ia no ka unuhi ʻana a me ka hoʻomaʻemaʻe ʻana i ka nui o ka RNA mai nā cell moʻomeheu i nā papa 96, 24, 12, a me 6-well.

Ka holo hana

Diagram

Ua mālama ʻia ke kiʻi pākaukau agarose gel o ka Cell Total RNA Isolation Kit i nā helu like ʻole o luna, 20μl volume elution, e lawe i ka 2μl i hoʻomaʻemaʻe ʻia i ka RNA 1%.

Ka mālama ʻana a me ka mālama ʻana

Hiki ke mālama ʻia ka pahu no 12 mahina ma ka lumi wela (15–25 ℃) a i ʻole 2–8 ℃ no ka manawa lōʻihi (24 mau mahina).

Hiki ke mālama ʻia ʻo Buffer cRL1 ma 4 ℃ no 1 mahina ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka 2-hydroxy-1-ethanethiol (koho). Hiki iā mākou ke kuleana e hoʻokō i kāu mau koi a lawelawe maikaʻi iā ʻoe.ʻO kou leʻaleʻa ko mākou uku nui loa.Ke ʻimi nei mākou i kāu hōʻoia no ka hoʻonui hui ʻana no ke kumu kūʻai hale no Kina 64 Well Plate Magnetic Bead Nucleic Acid Extraction Kit DNA Rna Purification Isolation Kit me CE Mark., E hoʻomaka nā mea kūʻai aku!ʻO nā mea a pau āu e makemake ai, pono mākou e hana i kā mākou hiki ke kōkua iā ʻoe.Hoʻokipa maikaʻi mākou i nā manaʻo mai nā wahi a pau o ka honua holoʻokoʻa e hui pū me mākou no ka hoʻonui ʻana i kekahi.
Kumukuai Hale Hana NoKina Nucleic Acid Extraction Kit, DNA Rna Purification Isolation Kit, No ka ʻoi aku o ka ʻumi makahiki o ka ʻike ma kēia waiho ʻana, ua loaʻa i kā mākou hui ka inoa kiʻekiʻe mai ka home a ma waho.No laila ke hoʻokipa nei mākou i nā hoaaloha mai nā wahi a pau e hele mai e hoʻopili iā mākou, ʻaʻole wale no ka ʻoihana, akā no ka pilina.

ʻAʻole lawe ʻia ka RNA a i ʻole nā ​​​​hua RNA

Nui nā ʻano like ʻole e pili ana i ka pono o ka hoʻihoʻi hou ʻana, e like me: kiko kiko RNA maʻiʻo, ke ʻano o ka hana, ka nui elution, etc.

1. Hana ʻia ka ʻauʻau hau a i ʻole cryogenic (4 °C) centrifugation i ka wā o ka hana.

Manaʻo: E hana ma ka lumi wela (15-25 ° C) i ke kaʻina holoʻokoʻa, mai ʻauʻau hau a centrifuge i nā haʻahaʻa haʻahaʻa.

2. Ka mālama pono ʻole ʻana i ka laʻana a i ʻole ka nui o ka manawa e mālama ai i ka laʻana.

Manaʻo Manaʻo: E kūʻai i nā laʻana ma -80 °C a i ʻole i loko o ka hau hau i loko o ka wai hau a pale i ka hoʻohana pinepine ʻana i ka hau hau;e ho'āʻo e hoʻohana i ka ʻiʻo hou a i ʻole nā ​​​​pūnaewele moʻomeheu no ka unuhi ʻana i ka RNA.

3. lawa ole la'ana lysis.

Manaʻo Manaʻo: I ka wā e hoʻohui ai i ka ʻiʻo, e hōʻoia i ka hoʻomaʻemaʻe ʻia ʻana o ka ʻiʻo a ua hoʻokaʻawale ʻia nā mea kikoo e wehewehe i ka hoʻokuʻu ʻana o RNA.

4. ʻAʻole i hoʻohui pono ʻia ka eluent.

Manaʻo: E hōʻoia i ka RNase-Free ddH₂Hoʻohui ʻia ʻo O i kahi dropwise i ka waena o ka membrane kolamu hoʻomaʻemaʻe.

5. ʻAʻole i hoʻohui ʻia ka leo kūpono o ka ethanol piha i ka Buffer RL2 a i ʻole Buffer RW2.

Manaʻo Manaʻo: E hahai i nā kuhikuhi, e hoʻohui i ka leo kūpono o ka ethanol piha i ka Buffer RL2 a me Buffer RW2 a hui maikaʻi ma mua o ka hoʻohana ʻana i ka pahu.

6. ʻAʻole kūpono ke ʻano o ka laʻana.

Manaʻo: E hoʻohana i ka 10-20 mg o ka ʻiʻo a i ʻole (1-5) × 10⁶nā pūnaewele no 500 μl buffer RL1, no ka mea, hiki i ka hoʻohana ʻana i ka ʻiʻo nui ke hopena i ka hōʻemi ʻana i ka RNA extraction.

7. Ka nui elution kūpono ʻole a i ʻole ka elution piha ʻole.

Manaʻo: ʻO ka nui elution o ke kolamu hoʻomaʻemaʻe ʻo 50-200 μl;inā ʻaʻole ʻoluʻolu ka hopena elution, pono ia e hoʻolōʻihi i ka manawa kau wela o ka lumi ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka RNase-Free ddH preheated.₂ʻO, e laʻa no 5-10 min.

8. He koena ethanol ka kolamu hoʻomaʻemaʻe ma hope o ka holoi ʻana o Buffer RW2.

Manaʻo Manaʻo: Inā loaʻa ke koena ethanol ma hope o ka holoi ʻana o Buffer RW2, ʻo ka centrifugation paipu ʻole no 1min, hiki ke hoʻonui ʻia ka manawa no ka hana centrifugation pahu ʻole i 2min, a i ʻole ke kolamu hoʻomaʻemaʻe hiki ke kau ʻia ma ka lumi wela no 5 min e wehe pono i ke koena ethanol.

Hoʻohaʻahaʻa ʻia ka RNA hoʻomaʻemaʻe

ʻO ka maikaʻi o ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia e pili ana i nā mea e like me ka mālama ʻana i ka laʻana, RNase contamination, a me ka manipulation, etc.

1. ʻAʻole mālama ʻia nā ʻāpana kiko i ka manawa.

Manaʻo Manaʻo: Inā ʻaʻole hoʻohana ʻia nā laʻana a i ʻole nā ​​​​pūnaewele i ka manawa kūpono ma hope o ka hōʻiliʻili ʻana, e mālama koke i ka cryopreserve ma -80 °C a i ʻole ka wai nitrogen.No ka unuhi ʻana i ka RNA, e hoʻohana i kahi ʻiʻo i lawe ʻia a i ʻole ka laʻana cell i ka wā hiki.

2. ʻO ka hoʻoheheʻe hou ʻia ʻana o nā laʻana kiko.

Manaʻo Manaʻo: I ka wā e mālama ai i nā laʻana ʻiʻo, ʻoi aku ka maikaʻi e ʻoki ʻia i mau ʻāpana liʻiliʻi no ka mālama ʻana, a e wehe i kekahi o nā ʻāpana i ka wā e hoʻohana ai ia mau mea e pale aku ai i ka hoʻoheheʻe pinepine ʻana o ka hāpana a me ka hōʻino ʻana o RNA.

3. Hoʻokomo ʻia ʻo RNase a ʻaʻole hoʻohana i nā mīkina lima hoʻolele, masks, etc. i ka wā o ka hana.

Manaʻo Manaʻo: Hana maikaʻi ʻia nā hoʻokolohua RNA extraction ma nā keʻena hoʻoponopono RNA kaʻawale a holoi ʻia ka papaʻaina ma mua o ka hoʻokolohua.

E hoʻohana i nā mīkina lima a me nā maka i ka wā o ka hoʻokolohua e hōʻemi i ka hōʻemi ʻana o RNA ma muli o ka hoʻokomo ʻana o RNase.

4. Ho'ohaumia 'ia nā reagents me RNase i ka wā e ho'ohana ai.

Manaʻo Manaʻo: E hoʻololi me kahi Animal Total RNA Isolation Kit no nā hoʻokolohua pili.

5. ʻO nā paipu centrifuge, nā ʻōlelo aʻoaʻo, a me nā mea ʻē aʻe i hoʻohana ʻia i ka RNA manipulation ua haumia me RNase.

Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia i ka RNase-Free nā paipu centrifuge, nā ʻōlelo aʻoaʻo, nā pipette, a me nā mea ʻē aʻe i hoʻohana ʻia i ka unuhi RNA.

Hoʻopili ka RNA i hoʻomaʻemaʻe ʻia i nā hoʻokolohua ma lalo

Hoʻomaʻemaʻe ʻia ʻo RNA e ke kolamu hoʻomaʻemaʻe, inā ʻoi aku ka nui o nā ion paʻakai, ʻoi aku ka nui o ka protein ma lalo o ka hoʻokolohua, e like me: reverse transcription, Northern Blot et al.

1. He koena iona paakai ko ka RNA i hooleiia.

Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia ua hoʻohui ʻia ka nui kūpono o ka ethanol i ka Buffer RW2 a hana i 2 holoi kolamu hoʻomaʻemaʻe ma ka wikiwiki centrifugal i hōʻike ʻia no ka hana;inā loaʻa kekahi koena ion paʻakai, waiho i ke kolamu hoʻomaʻemaʻe iā Buffer RW2 no 5 min ma ka lumi wela a hana centrifugation e hoʻonui i ka wehe ʻana o ka paʻakai.

2. Ke koena ethanol i loko o ka RNA i hoʻoheheʻe ʻia.

Manaʻo Manaʻo: E hōʻoia ma hope o ka holoi ʻana i ka pahu RW2 holoi, e hana i ka hana centrifugation paipu ʻole ma ka wikiwiki centrifugation i hōʻike ʻia no ka hana, e hoʻonui i ka manawa o ka hana centrifugation pahu ʻole i 2 min inā he koena ethanol, a waiho paha i ka lumi wela no 5 m.